钙网蛋白参与缺血后处理减轻大鼠骨骼肌缺血再灌注损伤作用.pdfVIP

生理学报 Acta Physiologica Sinica, October 25, 2007, 59 (5): 643-650 643 研究论文 钙网蛋白参与缺血后处理减轻大鼠骨骼肌缺血 / 再灌注损伤 * 张振英，刘秀华 ，郭晓笋，刘凤英 中国人民解放军总医院病理生理研究室，北京 100853 摘 要：本实验分别在整体和细胞水平观察缺血后处理(ischemic postconditioning, I-postC)对骨骼肌缺血/ 再灌注(ischemia/ reperfusion, I/R)损伤的影响，并探讨钙网蛋白(calreticulin, CRT)介导的信号转导机制。(1)整体实验：健康雄性Wistar 大鼠 48 只，无创动脉夹夹闭右侧股动脉4 h ，松夹再灌注12 h 或24 h 建立大鼠右后肢I/R 损伤模型，随机分为I/R 组、缺血预 处理(ischemic preconditioning, IPC)组(5 min 缺血/5 min 再灌，3 个循环)和I-postC 组(1 min 再灌/1 min 缺血，3 个循环) (n=16) ， 大鼠左后肢做对照处理。再灌注结束时测定血浆乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)活性、骨骼肌湿干重比值(wet/dry weight ratio, W/D) ；电镜观察骨骼肌超微结构变化；Western blot 检测骨骼肌CRT 、钙调神经磷酸酶(calcineurin, CaN) 的表 达。(2)细胞培养实验：原代培养Spragu e-Dawley 乳鼠骨骼肌细胞，随机分为6 组：正常对照组、缺氧/ 复氧(hypoxia/ reoxygenation, H/R)组、缺氧预处理(hypoxic preconditioning, HPC)组、缺氧后处理(hypoxic postconditioning, H-postC)组、 CaN 抑制剂环孢素A (cyclosporine, CsA) + H/R 组和CsA + H-postC 组。台盼蓝排斥实验、流式细胞仪检测细胞损伤情况； Western blot 检测骨骼肌细胞CRT 和CaN 的表达。结果显示：(1)在整体动物实验中，I-postC 可显著降低血浆LDH 活性 和组织水肿，骨骼肌超微结构损伤减轻，无细胞核凋亡现象，与IPC 组相比无显著差异。I-postC 再灌注12 h 和24 h CRT 表达分别较I/R 12 h 和24 h 组高4.39 倍和1.02 倍(P0.05) ，CaN 表达分别增高1.96 倍和0.63 倍(P0.05) 。相关分析显示CRT 表达与CaN 表达呈正相关(r=0.865, P0.01) 。(2)在细胞培养实验中，H-postC 可减轻H/R 诱导的骨骼肌细胞凋亡，增加细 胞存活率，与HPC 组相比无显著差异，CsA 可抑制H-postC 的保护作用；H-postC 可上调CRT 和CaN 的表达，分别较 H/R 组增加31.8% (P0.05)和6.02% ，加入CsA 后CaN 表达降低44.02% (P0.05 vs H-postC) 。上述整体实验和细胞培养实 验结果提示，I-postC 与IPC 保护作用相似，可显著减轻I/R 损伤；CRT 上调介导的CaN 表达增加可能参与了I-postC 的保 护作用，抑制CaN 表达可降低I-postC 的保护作用。 关键词：缺血后处理；缺氧；钙网蛋白；钙调神经磷酸酶；环孢素A 中图分类号：R3 63 .2 ；R 68 5 Calreticulin is involved in ischemic postconditioning-induced attenuation of ischemia/reperfusion injury in rat skeletal muscle * ZHANG Zhen-Ying, LIU Xiu-Hua , GUO Xiao-Sun, LIU Feng-Ying Department of Pathophysiology, Chinese PLA General Hospital, Beijing 100853, China Abstract: The present study was aimed to