高产壳聚糖酶菌株筛选和发酵产酶条件的研究.pdfVIP

维普资讯 第 35卷 第2期 中 国 海 洋 大 学 学 报 35(2)：287～292 2005年3月 PER10DICAIOF0CEAN UNIVERSITY OF CHINA M al．，2005 高同J产冗壳聚糖酶菌株的筛选和发酵产酶条件研究 逢玉娟，韩宝芹 ，刘万顺，杨菊林 (中国海洋大学海洋生命学院，山东 青岛266003) 摘 要 ： 为探讨专一性地降解 甲壳质或壳聚糖的甲壳质酶或壳聚糖酶，从采集的土样中分离到4株产壳聚糖酶能力较 强的菌株。经摇瓶复筛，菌株YJ02产酶能力最强。对其发酵产酶条件的研究结果表明其产酶最适培养基组分为 (％，w／ v)：粉末壳聚糖2．0，葡萄糖0．1，NH4NO31．0，酵母提取物0．5，K2HPO40．07，KH2PO40．03，NaC10．5，MgSO4’7H200．05， 起始pH6．0。最适产酶培养条件是：500mL三角烧瓶装瓶量为 150mL，2．0％(v／v)接种量，30C，150r／min培养 72h。在 最适产酶培养条件下。72h时菌株 YJ02发酵液中壳聚糖酶活力可达到 17．04U／mL。 关键词： 壳聚糖；壳聚糖酶；发酵条件；筛选 中图法分类号 ： Q503 文献标识码 ：A 文章编号 ： 1672—5174(2005)02—287—06 壳聚糖(Chitosan)是 甲壳质脱乙酰基的产物，是一 和发酵产酶条件，以期对酶法生产壳寡糖提供实验基 类 由2一氨基一2一脱氧一葡萄糖和 2一乙酰氨基一2一脱氧一葡萄 础 。 糖(40％)单体通过 G一1，4糖苷键连接而成的直链多 糖，含有游离的氨基，是天然多糖中唯一 1种含有阳离 1 材料和方法 子的高分子聚合物，因而具有许多优越的特性。但 由 于其只能溶于酸性溶液，影响了它在各行业的应用，其 1．1土样 从污水排放处采集土样供菌种分离。 降解产物壳寡糖和氨基葡萄糖，则具有很好的水溶性。 1．2培养基 (1)初筛培养基 (平板分离培养基)组分为 (％，w／v) 近几十年来，随着有关 甲壳素的研究在国内外的广泛 展开，壳寡糖由于其独特的生理活性和功能性质而引 (NH4)2SO40．5，K2HPO40．2，NaC10．5，MgSO4·7H2O 0．1，胶体壳聚糖 1．0，琼脂 2．0，调 pH至 6．5。 起了国内外的重视，特别是在医药、保健品方面的应用 (2)复筛培养基(液体诱导培养基)组分为 (％，w／v)蛋 前景倍受瞩 目[1-2]。 白胨 0．5，酵母提取物 0．5，K2HP40 0．07，KH2PO4 在以往的研究中，壳寡糖的制备一般采用化学降 0．03，NaC10．5，MgSO4·7H2O0．05，粉末壳聚糖 1．0， 解法，但化学法中采用强酸降解存在酸碱污染、降解产 调 pH至 6．5。 物聚合度小、产物分离纯化难，以及反应条件不易控制 (3)斜面种子培养基组分配方同平板分离培养基。 等缺点，故不够理想。而酶解法以条件温和、产率高、 (4)液体种子培养基组分为 (％，w／v)蛋白胨0．5，酵母 反应易控制、产物聚合度适中以及不造成环境污染等