第1讲 细胞因子与细胞粘附因子的测定.pptVIP

第一节　生物学测定方法 一、促进细胞增殖和抑制细胞增殖测定法 二、细胞毒活性测定法 三、抗病毒活性测定法 四、趋化活性测定法 五、生物学活性测定方法学评价 第三节 分子生物学检测方法 一、Northern和Southern Blot 二、PCR和RT-PCR 三、原位杂交、原位PCR和原位RT-PCR 第四节 细胞因子与细胞粘附分子测定的临床应用 一、临床应用原则 二、特定疾病诊断的辅助指标 三、评估机体的免疫状态、判断治疗效果及预后 是由活化的免疫细胞及某些基质细胞表达并分泌的活性物质，其主要生物学功能是介导和调节免疫应答及炎症反应，其化学本质是蛋白质或多肽。 细胞因子的主要生物学作用 1、抗感染和抗肿瘤 2、免疫调节作用 3、刺激造血细胞增殖分化 4、参与和调节炎症反应 5、其它 细胞因子的作用特点 1、分泌特点：自分泌、旁分泌、内分泌性 2、多源与同源性 3、高效性 4、多效性（pleiotropy） 5、重叠性（redundancy） 6、协同性 7、拮抗性 8、网络性 粘附因子以结构特点进行划分的分类 1、粘蛋白样家族（integrin family） 2、免疫球蛋白超家族（immunoglobulin superfamily,IgSF) 3、选择素家族（selectin family） 4、整合素家族（Integrin family） 5、钙离子依赖性家族（简称钙粘素Cadherin） 6、其它未归类的粘附分子如CD36、CD44、CD45等 粘附因子功能及应用：主要功能是调节细胞与细胞、细胞与间质之间的相互作用。病理情况下，由于粘附因子在细胞表面或血循环中的数量和质量有所改变，进而影响原有细胞与细胞、细胞与间质之间的平衡，因此，细胞内外粘附因子的测定对于某些疾病的发生发展机制探讨、辅助诊断、治疗监控及预后方面有重要应用价值。 (2) MTT 比色法 原理：一种不使用放射性核素，以细胞代谢作为细胞增殖指示物的细胞因子生物活性间接测定方法。 MTT在活细胞线粒体中的在脱氢酶的作用下，被还原成不溶于水的蓝紫色产物（formazan)，其量与细胞增殖的程度呈正比。二甲亚砜（DMSO）能溶解沉积在细胞中蓝紫色结晶物，溶液颜色深浅与所含的formazan量成正比。再用酶标仪测定OD值。 活化剂 第1步中：分离和培养靶细胞 培养靶细胞需要活化剂与靶细胞一起培养使其活化 T细胞活化剂：抗原、植物血凝素（A）、离子霉素、抗T细胞受体抗体、抗CD3抗体 B细胞活化剂：抗原、脂多糖（LPS）、金黄色葡萄球菌内毒素A受体、B细胞受体抗体 单核细胞活化剂：脂多糖（LPS）、某些细胞因子。 为增强靶细胞活化，上述活化剂可以共用。 第三节、分子生物学测定方法 一、Northern和Southern Blot 二、PCR和RT-PCR PCR-SSCP、PCR-RFLP、荧光实时定量PCR 荧光实时定量RT-PCR、直接测序等 三、原位杂交、原位PCR和原位RT-PCR 测定的是细胞因子的基因，揭示何种细胞因子基因的改变与特定疾病发生发展之间的关系 1．细胞因子和细胞粘附分子概念？可分为几类？细 胞因子的作用特点有哪些？ 2．细胞因子生物测定法的原理、种类、优缺点，放射性核素法、MTT比色法检测细胞因子的原理。 3．ELISA法在细胞因子和粘附分子检测可应用于哪些 方面？可溶性（细胞因子、细胞因子受体、粘附因子） 常用模式：双抗体夹心法 4．ELISPOT的原理、用途、与ELISA的异同是什么？ 6. 细胞因子测定免疫学方法有哪些种类？优缺点？ 7．在应用流式细胞术分析细胞因子时，不同的靶 细胞分别需要哪些活化剂？ 8．在临床疾病诊断中，检测细胞因子和粘附分子 的意义是什么？应用细胞因子检测方法的原则 有哪些？ 细胞因子和粘附分子是构成免疫应答的重要物质基础，检测这些分子可反映机体的免疫状态。 细胞因子或粘附分子的检测方法包括生物学测定法、免疫测定法和分子生物学测定法三大类。 细胞因子检测的临床应用有哪几方面？对某些特定疾病具有诊断价值；对细胞因子治疗具有监测和指导用药的意义；对机体的免疫状态具有评价作用。 填空题 后续反应：待测细胞分泌细胞因子后，洗涤去除未结合于固相的细胞，然后加入相应的酶标抗特定细胞因子的抗体，反应后洗板，加入酶标底物显色测定，显色深浅与结合于固相细胞内细胞因子成正比，并可在光学显微镜下观察分泌细胞因子细胞。 原因：一般情况下，细胞因子在血循环和体液内浓度很低，只有在特定的病理情况下入炎症、肿