生殖支原体检测及流行病学调查.pdf

生殖复原体检测及流行病学调查 致 谢 在三年的研究生学习期间，我得到了许多师长和朋友 的指导和帮助。 首先．要特别感谢我的导师赵季文教授，在整个：选题、 采样及实验过程中，赵老师都倾注了大量的心血。正是他 严谨的作风和悉心的教导，使我受益匪浅，终生难忘。 其次，要感谢东南大学医学院流行病学教研室的王蓓老 师和天津铁路防疫站的崔玉明老师在细胞培养等各方面给 予的热心指导和无私帮助。衷心感{身十江宁老师、徐萃瑜老 师的大力协助和鼓励。感谢无锡克隆遗传研究所的糜祖煌 老师、秦玲老师在分子生物学方面给予的热心帮助：感{身j 天津医科大学总医院的缴稳苓、车雅敏、李君等老师在标 本采集等方面给予的大力协助。同时也要感谢我身边的马 昆岭、陈苏宁、贾宏彬、王婷、董晓梅等同学和朋友的支 持和协助。 最后，谨向养育和鼓励我的父母家人深表谢意! 生殖支原体检测及流行病学调查 生殖支原体(Mg)检测及流行病学调查 (摘要) f生殖支原体(Mycoplasmagenitalium，Mg)是近年来新发现的人 ＼ 类第十二种支原体。国外大量研究资料表明，它感染的致病惜和鲴 胞毒性比解脲脲原体fUu)和人型支原体(Mh)更强，可引起人类 生殖泌尿道感染和围产期疾病，并且有可能是急、慢性尿道炎，不 育症及关节炎等疾病的病因之一。[]ieL，国外学者列Mg的研究非 常重视，并在Mg的基本特性研究，、与临床疾病的关系及实验室：夸 断等方面取得很大进展。我国自九十年代中期引进Mg标准蓖抹 (G一37)以来，开展了Mg的基础应用研究，并到现场列高危人群 进行检测，成功地分离到了Mg菌株：目前，国内外实验室tP对Mg 的检测方法主要有分离培养法、分子生物学方法和血清学力法．分 离培养到Mg菌株，是探讨某一地区是否存在Mg感染的“金标准“． 但由于Mg生长缓慢，营养条件要求极高，因此，对临床标本摩晤 传统的培养基培养法进行Mg的分离培养，其成功率很低；分子生 物学方法有敏感、快速、特异等优点，但应用这一技术时，对仪嚣、 试剂及实验室的要求太高，医此极大地阻碍了这一技术的推广应毕： 血清学方法目前所检测的，均为特异’陆抗体这 间接指标，而人们 对于感染Mg后，抗体的产生及消长情况尚不十分清楚，并且会士 ， 生殖支原体检测及流行病学调查 现与肺炎支原体有交叉反应，因此这一检测方法也有一定的缺陷。 鉴于上述原因，我们从流行病学研究及临床诊断的需求出发，旨在 建立一种能够提高临床标本中Mg分离存活率，缩短初代培养时间 的组织细胞培养法，从病原学上证实Mg感染的存在，并且为实验 室研究提供菌株；同时建立一种简易、’陕速、敏感特异性均较好的 ELISA方法，它可以直接测得标本中的Mg抗原，满足临床检测及 、 流行病学调查的需求：r—t厂一 ， 本研究可分为两部分，分别就Mg自≈坌妾揸蓥及抗匠捡捌方法 的建立和应用进行了探讨。第一部分我们在国内，首次对利用Veto 细胞分离培养圭堕壅匾签的方法，进行了初步研究。在此基础上， 同时采用培养基培养法和初次探索出来的细胞培养法，对临床标本 进行Mg的分离培养。f结果表明，采用培养基培养法，自159份临 ＼ 52％，初代生长时间平均 床标本中分离培养出4株Mg，分离率为2 为68天；而采用细胞培养法，自190份标本中分离培养出8株Mg， 分离率为4．21％，初代生长时间(从细胞培养开始至第一代SP．4培养 JG等所描述 基变色)平均为24天：分离培养出的Mg菌株符合Tully 的特征：1．仅能在sP-4培养基中生长；2．发酵葡萄糖，不分解精氨酸 和尿素；3．对青霉素不敏感；4肩8通过450nm的微孔滤膜