人精子蛋白17原核表达及单克隆抗体制备.pdfVIP

中 文 摘 要 人精子蛋白17的原核表达及单克隆抗体制备 研究生：杨爱龙 导师：张建琼教授 李芳秋教授 东南大学基础医学院遗传与发育生物学系 中 文摘要 精子蛋白17(sperInprotein17，spl7)是一种高度保守的睾丸特异性蛋白，参与 精子的顶体反应，促进受精过程。人体其他正常组织和细胞极少表达sDl7。近年来发 现浚蛋白基凶在一些恶性肿瘤组织中被激活并高水平表达。spl7在正常组织中局限表 达和在恶性肿瘤组织中异常表达，使其在肿瘤诊断中具有潜在价值，有望作为肿瘤诊 断的辅助标志，尤其是对于女性肿瘤患者。为此，我们在mRNA水平初步检测spl7 在卵巢癌组织中表达，对人spl7基因进行了克隆和原核表达，制备了抗spl7单克隆 抗体，并通过免疫组化法检测Spl7在卵巢原发上皮性癌和子宫内膜癌组织中表达情 况，结果如下： 1．RT_PcR检测表明：13例原发卵巢癌组织中，11例表达Spl7mRNA，阳性率 为84．6％，呈高水平表达；3例卵巢癌病人腹水，1例检出spl7mRNA；13例其它肿 瘤组织则阴性。 cDNA，并 2．spl7基凶的克隆和原核表达。用R1二PcR法从人睾丸中扩增Spl7 IPTG诱导表达，Ni_NTAHis—Bind树脂纯化重组蛋白，并用飞行质谱仪检测分析其氨 基酸序列。 4．免疫组化检测spl7在妇科肿瘤组织中表达情况。卵巢原发上皮性癌组织31 率为68．7％；卵巢性索一问质肿瘤和生殖细胞瘤共7例，均未见表达spl7。 以上研究结果提示spl7可能成为卵巢癌诊断和子宫内膜癌的辅助标志。 关键词：精子蛋白17；基因克隆；原核表达；单克隆抗体 英 文 摘 要 and Expression Prokaryotic of of．Human Monoclonal Antibody Sperm Protein17 Postgraduate：YANGAi—long ： ZHANG Tutor(Pro．) Jian—qiong，LIFang—qiu ABSTRACT 1 7)isa conseⅣativeintestisandanovel S口enn口rotein7(Spl very protein inacrosomereactionof to amigen(C1’A)．Spl7panicipates spemlatozoapromote otllernorrnal 7is inhumantestis，butnotin tissue．Itwas Spl abundantlvexpressed reported that is in26％of 83％ofovarian Spl7aberrantlyexpressed multiplemyeloma(MM)and asamarkeroftumor anda moleculeof 7canbeused carcinoma(OC)．Spl