西农萨能奶山羊gBTN1A1基因的筛选、克隆及序列分析.pdfVIP

维普资讯 农业生物技术学报 JournalofAgriculturalBiotechnology 2007，15 (5)：772-777 · 研究论文 · 西农萨能奶山羊gBTN1A1基因的筛选、克隆及序列分析木 张丽娟，罗 军 料，武会娟，刘俊霞，韩雪峰，张 宁，王海滨，单翠燕，余 刚 (西北农林科技大学动物科技学院，杨凌 712100) 摘要：利用抑制消减杂交技术研究同一只西农萨能奶山羊泌乳中期和末期的乳腺组织差异表达基因，以泌乳中期乳腺 cD- NA为测试组，末期乳腺eDNA为驱动组 ，构建消减文库，得到山羊(Caprahircus)嗜乳脂蛋白基因的部分序列。根据牛(Bos)和 绵羊(OvisariesL．)基因组序列进行电子拼接 ，并设计引物，得到山羊嗜乳脂蛋白基因的CDs区全序列，应用RT—PCR技术从山 羊乳腺组织总RNA中扩增克隆了山羊嗜乳脂蛋白基因CDs区，命名为gBTNIAI，并登录GenBank(EF102891)。gBTNIAI基 因开放读码框由l581个碱基组成，编码526个氨基酸，前26个氨基酸为推定的信号肽区域。gBTNIAI基因核苷酸序列与牛 (NM．174508)、人(NM一001732)和鼠(AK145l68)的同源性分别为97％、88％和84％，氨基酸序列的同源性分别为96％、84％和 70％。其二级结构 、跨膜区域及信号肽分析均与牛、人和鼠的BTNIAI基因相似。 关键词：西农萨能奶山羊；嗜乳脂蛋白；抑制消减杂交 ；克隆；序列分析 中图分类号：Sl88 文献标识码：A 文章编号：l006．1304(2007)05—0772—06 Screening，CloningandSequenceAnalysisofgBTNIAIGene inXinongSaanenDairyGoat ZHANGLi-juan，LUOJun料 ，wUHui-juan，LIUJun-xia，HANXue-feng，ZHANGNing， WANGHai-bin，SHAN Cui-yan，YU Gang (CollegeofAnimalScienceandTechnology,NorthwestAgricultureandForestryUniversity,Yangling712100,China) ^b—瞅 ThemammaryglandsinmiddleandlatestagesoflacattionoftheXinongSaanendairygoatwerechosentoisolatedif- ferentiallyexpressedgenes，andaforwardsuppressionsubtractivehybridization (SSH)eDNAlibrarywasconstructed．SSHwasper- formedfromeDNAofdriver(mammaryglandinlatelacattionsatge)andtester(mammaryglandinmiddlelacattionsatge)．Thepar- tialsequenceofgoat (Caprahircus)butyrophilingenewasscreenedrfomsubtractedeDNAlibraryofdifferentiallyexpressedgenes． Th eeDNA ofgoatbutyrophilin genewasamplifiedandcloned rfom toatlRNA ofgoatmammaryglandbyRT—PCR，namedas gBTNIAI，andregisteredinGenBank (GenBankaccessionNo．EF102891)．gBTNIAIgenewihtanORFof1581nucleotidesen— codedapolypepfid