谷胱甘肽过氧化物酶模拟物2-TeCD对过氧化氨诱导人成神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡的抑制.pdfVIP

谷胱甘肽过氧化物酶模拟物 2一TeCD对过氧化氢诱导人成神经母细胞瘤 SH—SY5Y细胞凋亡的抑制 王 程 徐亚维 谷胱甘肽过氧化物酶模拟物 2一TeCD 对过氧化氨诱导人成神经母细胞瘤 SH—SY5Y细胞凋亡的抑制 王 程 ，一，徐亚维 (1．吉林农业科技学院生物工程学院，吉林 吉林市 132013；2．吉林医药学院基础医学院，吉林 吉林市 132013) 摘 要 ： 目的：探讨谷胱甘肽过氧化物酶模拟物 2一reCD对 诱导 SH—SYSY细胞发生凋亡的影响。方法 ：用 ％o^和2一IeCD分组 作用于人神经母细胞瘤 sH—SY5Y细胞，检测对细胞的存活率、凋亡率、细胞相对活性、凋亡相关基因Bax、Bcl一2和相关蛋白Hsp70、 caspase一3的表达。结果：2一TeCD可明显提高 (=)2损伤 sH—SY5Y细胞的细胞存活率和细胞相对活性；下调促进凋亡基因Bax和上调 抑制凋亡基因Bcl一2；降低 caspase一3的表达量而对H~pT0无较大影响 结论：2一TeCD对H2O2诱发的sH—SYSY细胞凋亡具有明显的 抑制作用，可成为潜在的抗氧化药物 关键词：2一位碲桥联环糊精 ；过氧化氢 ；SH—SY5Y细胞 ；凋亡 中图分类号：Q554 文献标识码：A 分子生物学和遗传学的证据都表明外源性活性氧 (Reac— 1．2．4 培养菸同时加 20 M2一TeCD和0．2n1MH，02为保护 tiveoxygenspecies，ROS)与许多疾病 的发生 、发展都和有关， 组 。 如脑出血、肿瘤、克山病和衰老等…。在疾病发生过程中，谷 1．3 细胞存活率检测 4【 胱甘肽过氧化物酶 (Glutathioneperoxidase，GPx)的活力表现下 各组 SH—SY5Y细胞消化离心 ，去上清液，重悬于 lmL 降，故此 GPx作为潜在的抗氧化药物有待开发。由于天然GPx PBS中，加入 100~／L0．4％的台盼蓝染色 2rain，血球计数板计 稳定性差、分子量大，又难于采用重组技术获得，因此研究稳 数，计算各组细胞存活率。细胞存活率 (％)= (细胞总数 一 定性好 、高效低毒的GPx的人二[：模拟物具有重要意义。2一位 蓝色细胞数)／细胞总数 ×100％。 碲桥联环糊精 (2一tellurium—bridged～j3一cyclodextrin，2一 1．4 细胞凋亡率检测 【J TeCD)是化学合成的具有 GPx活性 的小分子含硒模拟物之 胰酶消化后的各组细胞加入 1mL预冷的80％乙醇固定细 一 l2J ， 其GPx活力为46．7U／t~mol。若能开发成药物 ，将具有一 胞，一2WC保存过夜待用。PBS洗涤细胞 2次，重悬于 200,／L 定的经济和社会效益。 结合缓冲液，加入 5vLDAPI，室温避光孵育 15min，加入 300 过氧化氢 (hydrogenperoxide，H2o2)可诱导细胞氧化应激 结合缓冲液上流式细胞仪检测。 并导致细胞凋亡。神经系统对 ROS十分敏感而易发生凋亡， 1．5 细胞相对活力检测 【j 可能是在氧化应激等因素的诱导下细胞基因表达和各种酶的活 各组 SH—SYSY细胞稀释成 1×105mL 悬液并置于96孔 性发生变化而致 3¨J。本论文以H202诱导人成神经母细胞瘤 sH 板中培养至贴壁后弃上清。每孔加 0．25g／LMqT溶液 200~t／L， — SY5Y细胞凋亡为模型，为进一步探讨 2一TeCD抑制 }{202诱 孵育 4h，弃上清，每孔再加 1501~LDMSO，振 荡 10min，在 导神经细胞凋亡的机制，同时也为抗氧化药物设计和开发提供 570nm测吸光度值。细胞相对活力 (％)=各组 A值 ／空白组 一 定的理论依据。 A值 ×100％。 1 材料与方法 1．6 实