凡纳滨对虾覆膜养殖池塘沉积物微生物群落的磷脂脂肪酸谱图分析.pdfVIP

. . .水 产 学 报 第 卷第 期., 年 月 文章编号:? ? ?: . / .. . . 凡纳滨对虾覆膜养殖池塘沉积物 微生物群落的磷脂脂肪酸谱图分析 翟海佳 , 郑忠明 , 金中文 , 陆开宏 , 孙 芳 , 汪 洋 , 李越蜀 ; .宁波大学教育部应用海洋生物技术重点实验室,浙江宁波 .宁波市海洋与渔业研究院,浙江宁波 摘要:于 年 ? 月,选择浙江省宁波市 个凡纳滨对虾覆膜养殖池塘进行水质、沉积 物理化因子的研究,并采用磷脂脂肪酸谱图法研究了沉积微生物在不同养殖阶段的 群落结构变化及其与环境因子的相关性。结果表明,在整个凡纳滨对虾养殖期间,沉积物组成以饱和脂肪酸、支链脂肪酸和单不饱和脂肪酸为主,多不饱和脂肪酸与环丙烷脂 肪酸含量较少。微生物总生物量、细菌生物量和真菌生物量伴随着养殖的进行都明显增加。 虽然沉积物微生物是以细菌为主体,但真菌更适应沉积物的环境,因此细菌与真菌的比值在不 断降低。 细菌与 一细菌的比值表现在养殖后期比中期有所下降,但在未期变化不明显。 冗余分析 表明,微生物总生物量、细菌生物量和真菌生物量与总氮 正相关性最为 显著, 细菌生物量和 一细菌生物量与一 、一 呈现显著的正相关,这些微生物群 落结构因子全部和透明度 呈现显著负相关关系。 关键词:凡纳滨对虾;覆膜池塘;沉积物;微生物群落结构;磷脂脂肪酸谱图 中图分类号: . ; . 文献标志码: 池塘沉积物是指池塘水体范围内发生的物 菌、产 细菌和硫酸盐还原菌的数量变化进行监 理、化学及生物学过程所产生的沉降物质,是养殖 测;申玉春等 用血球板计数法对凡纳滨对虾 生态系统的重要组成部分。沉积物中的有机质一 高位池沉积中的细菌数量 部分可以被底栖生物同化,还有很大一部分需要 的动态变化进行了研究;钱丽君等 用传统平板稀 微生物的参与才能进行分解 。因此,池塘中的 释法对三疣梭子蟹养殖 微生物生态系统状况,微生物数量种群组成上的 池塘泥样中的细菌进行分离纯化,并应用? 变动以及代谢分解有机物的能力对养殖环境有很 方法揭示各类群细菌的分类多样性; 大的影响 。由于养殖生态系统的特殊性,池塘 等 对养殖池塘表层沉淀物中微生物的活动特点 内微生物群落不仅受到环境中能源、营养、捕食等 进行了研究。但目前这些研究大都是建立在分离 因素的影响还要受到各种有序的人类活动的干 培养计数的基础之上,然而大部分环境微生物处于 预,如人工投饵、增氧、调节 等。因此,养殖环 存活不可培养状态,使得通过传统培养分离法了解 境中微生物群落结构的变化应该呈现一定的规律 环境微生物生物量与群落结构变化比较困难;另外 性,反应当时养殖系统的健康状况。 由于不同地域气候、气象特点不同,养殖品种不同, 有关养殖池塘沉积物中微生物的相关研究已 各地的养殖水域和池塘的生态系统有其显著的特 有较多报道,贾俊涛等。。 采用围隔实验生态学方 点,因此不同养殖池塘沉积物微生物生物量与群落 法,对对虾养殖池塘沉积物中的细菌总量、氨化细 结构之间的变化趋势往往不相同。 收稿日期: ? ?修回日期: ? ? 资助项目:国家科技支撑计划 ;宁波大学教研项目 通讯作者:郑忠明,:. . ://..水 产 学 报卷 近年来,磷脂脂肪酸, 是活体微生物细胞膜恒定组分,其对环境谱图分析技术已广泛应用于堆肥样品、湖 因素敏感且在生物体外迅速降解,因此特定菌群 泊沉积物和土壤微生物群落研究 ,但应用于 变化可反映出原位土壤细菌、真菌活体生 物量与菌群结构 。。” 。具体操作在养殖池塘沉积物种微生物群落结构分析还鲜有报 道。本研究通过现场调查,选择了新型养殖模式 等 的方法上加以改进: 提取,称 冷冻干 下的凡纳滨对虾覆膜养殖池塘,对其进行现场和 燥后的沉积物,加入柠檬酸缓冲液, 氯 实验室的水质及沉积物理化因子检测、并引入 仿,甲醇 柠檬酸缓冲液 : 氯仿 :法对沉积物中微生物群落结构不同时期的 甲醇. : . : . , ℃避光震荡 , 变化进行分析,通过主成分分析/ 离心后取上清液。再加入柠檬 , 和冗余分析酸缓冲液和氯仿 柠檬酸缓冲液:氯仿:甲醇, 研究环境因子与沉积物微生物群. : . : . ,震荡,避光条件下保存 落结构间的关系,旨在通过对新型养殖模式池塘 。经静置分离后,吸走上层水相部分,保留 环境微生物生态的研究,比较准确地了解其生态 底层氯仿相,在氮气下吹干氯仿。分离,使用 状况,监测环境变化,并用来指导养殖生产。 固相萃取装置分离 ,固相萃取小柱为?. . 材料与方法.,先用 氯仿清 . 采样池塘 洗小柱, 氯仿分批溶解样品后注入硅胶柱 选择浙江省宁波市横山码头的 个理化条件 内,然后依次分别加入 氯仿、 丙酮