生长抑素干扰载体的构建及筛选.docVIP

  生长抑素干扰载体的构建及筛选# 于雪，易佳，梁爱心** （华中农业大学动物科技学院） 5 10 15 20 25 30 35 40 摘要：生长抑素（SS）为生长激素的拮抗激素，其主要作用为抑制生长激素（GH）的分泌， 从而抑制动物的生长。本实验设计并构建了 3 条针对 SS 的干扰载体，随后将干扰载体脂质 体转染 BHK-21 细胞（仓鼠肾成纤维细胞），以沉默 SS 基因的表达。通过放射性免疫（RIA） 和荧光定量 PCR（qPCR）等方法检测各干扰载体的干扰效率。双酶切和测序鉴定结果证实 三个干扰质粒构建成功，且在细胞水平筛选到干扰效果可达 50%以上的片段。此结果可为进 一步研究生长抑素的功能以及生产转基因模型动物奠定基础。 关键词：生长抑素；肾成纤维细胞；RNA 干扰 中图分类号：S814 Construction and evaluation of RNA interference plasmid of Somatostatin Yuxue, Yijia, Liang Aixin (College of Animal Science and Technology,Huazhong Agricultural University) Abstract: Somatostatin (SS) is a kind of antagonism as to growth hormone, which inhibits the secretion of Growth Hormone (GH), thereby slowing the growth of animal The purpose of this study is to construct three pairs of plasmids with small interference RNA (siRNA) of Somatostatin gene (SS), and then transfect into BHK-21 cells which is proved to be a cell secreting somatostatin . RIA (Radio immunosorbent assay) and qPCR (Real-time PCR) methods were used to detect the efficacy of plasmied. The resutes showed that plasmid were successfully constructed , and the interference efficiency was demonstrated more than fifty percent at a cellular level. These results could lay the foundation for further study of the function of SS and production of transgenic animal models. Key words: Somatostatin；BHK-21；RNAi 0 引言 当品种、饲养条件、生产管理等方面因素的提高均达到一定的极限时，新的促生长方法 需要不断探索以提高动物的生产性能。以基因疫苗免疫的方式来提高动物的生产性能已成为 提高动物生产性能的有效途径[1-5]。生长抑素是生长激素的拮抗激素，与促生长激素释放激 素（GHRH）一起调控着动物的平衡生长。众多研究表明，通过抑制 SS 前体基因的表达， 降低 SS 在动物体内的浓度，可相应提高 GH 的分泌，从而达到促进动物生长的目的。RNA 干扰（RNAi）是双链 RNA 介导的序列特异性的转录后同源靶基因沉默效应[6-8]，在哺乳动 物细胞中可以诱导基因成默，现已被广泛用来抑制特定基因的表达[9-11]。通过构建生长抑素 的干扰载体，持续沉默生长抑素的表达，可以将动物的生长平衡点上调至一个新的高度，从 而在不攫取动物福利的情况下提高动物生产性能。本研究根据 SS 全长 cDNA 序列 （NM009215.1）设计和合成 3 对 RNA 干扰的靶序列，并利用含 LoxP 位点的 PB 载体—phi5 为载体，该载体含有 MCS、neo 基因（用于质粒构建与纯化过程中的筛选）以及 GFP 基因 （用于质粒转染过程中的对目的蛋白的定位及转染效率的观测）。另外，此载体可在 PB 转 基金项目：教育部新教师基金(20100146120027) 作者简介：于雪,1987-,女,博士生,主要研究方向:动物生殖生理与生物技术 通信联系人：梁爱心,1982-,女,讲师,主要研究方向:动物遗传育种与繁殖. lax