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饮料中各组分的分离测定 色谱科学自从1903年俄国的茨维特发明了液固柱色谱之后，已有近100年的历史。但是在20世纪末的20年间，以前所未有的速度发展，特别是进人生命科学。材料科学和信息科学时代，对分离分析提出越来越高的要求。常见的色谱可分为气相色谱、液相色谱、毛细管电泳。气相色谱法（GC）分离效率、选择性、灵敏度都很高，但是它只适用于热稳定性好、易挥发的物质。高效液相色谱法（HPLC）不受热稳定性及挥发性的限制，可以分析热稳定性差。难挥发的物质，但是和GC相比，缺乏灵敏的通用型检测器，实验中需消耗大量的有机溶剂，特别是对于大分子物质因其分子扩散系数小、传质阻力大，使柱效率大大降低，以至于难以分离分子量大于2000的物质。经典电泳技术和色谱理论相结合，利用毛细管电泳的分离模式多样化，毛细管内壁的修饰方法及流动的缓冲液中的添加剂的不同，以及新检测技术的发展，使毛细管电泳的应用非常广泛。可分离多种阴阳离子、生物大分子等，利用多种手性选择剂，具有高分离能力的毛细管电泳在手性分离中极为重要。 饮料中的成份相对比较复杂，其中各种不同的物质选择不同的色谱分离检测方法至关重要。本实验选取饮料中不同物质分别采用气相色谱、液相色谱、毛细管电泳等方法分离检测。通过实验对比，对各类色谱进行较深入了解。 内标法测定奶茶中香兰素的含量 实验目的 了解气相色谱法的基本原理及仪器结构. 了解气相色谱基本仪器操作. 掌握内标法的配样与计算方法. 实验原理 内标法：在分析测定样品中某组分含量时，加入一种内标物质以校准和消除出于操作条件的波动而对分析结果产生的影响，以提高分析结果的准确度。 使用内标法时，在样品中加入一定量的标准物质，它可被色谱柱所分离，又不受试样中其它组分峰的干扰，只要测定内标物和待测组分的峰面积与相对响应值，即可求出待测组分在样品中的百分含量。内标物应当是一个能得到纯样的己知化合物，和被分析的样品组分有基本相同或尽可能一致的物理化学性质(如化学结构、极性、挥发度及在溶剂中的溶解度等)、色谱行为和响应特征，最好是被分析物质的一个同系物。当然，内标物必须能与样品中各组分充分分离并不发生反应。 m—样品的质量； ms—待测样品中加入内标物的量； As—待测样品中内标物的峰面积； fs,i—组分i与内标物的校正因子之比，称为相对校正因子 香兰素（Vanillin），又名香草醛，分子式： C8H8O3，CAS号： 121-33-5， HYPERLINK /view/346251.htm \t _blank 分子量: 152.15，为一种广泛使用的可食用香料或医药中间体，本实验采取内标法测定奶茶中香兰素的含量。 仪器与试剂 Agilent 6890N气相色谱仪，10ul进样针，移液枪； 香兰素储备样（称取香兰素0.5022g，以氯仿定容到50ml容量瓶）； 2-甲氧基苯酚储备样（称取2-甲氧基苯酚0.4987g，以氯仿定容到50ml容量瓶）； 香兰素未知样，氯仿。 实验步骤 1、配置标准溶液：以移液枪量取100，200， 300，400ul香兰素储备液 和200，200， 200，200ul 2-甲氧基苯酚储备液 于5ml容量瓶中，用氯仿定容。 2、配置未知溶液：以移液枪量取200ul香兰素未知液和200ul 2-甲氧基苯酚储备液于5ml容量瓶中，用氯仿定容。 3、设定气相色谱参数：进样口：气化温度：250℃， 分流比：10:1； 色谱柱：流速：2.0ml/min; 柱温箱：120℃（保持1min），10℃/min升到200℃ 检测器：基座温度：250℃，H2：45ml/min, Air:450ml/min,N2:40ml/min. 保存。 4、进样：以以上方法测定标样及未知样，记录实验数据（保留时间及峰面积） 5、做出内标标准曲线，以内标法计算未知样中香兰素含量。 进样应注意的问题：GC中手动进样技术的熟练与否，直接影响到分析结果的好坏，正确的进样手法是：取样后，一手持注射器(防止气化室的高气压将针芯吹出)，另一只手保护针尖（防止插入隔垫时弯曲）。先小心地将注射针头穿过隔垫，随即快速将注射器插到底，并将样品轻轻注入气化室（注意不要用力过猛使针芯弯曲），同时按start键，拔出注射器，注射样品所用时间及注射器在气化室中停留的时间越短越好。 另外，在进多个不同样品时，每次进样前都要将进样针润洗干净，确保洗针溶剂不干扰样品检测。 数据处理 t(内标/min)t(香兰素/min)A（内标）A（香兰素）C（香兰素）/ C（内标）A（香兰素）/ A（内标）标样1标样2标