基础研究Gluc-Fluc双荧光素酶质粒转染MB49细胞后荧光表达特性.pdfVIP

2011;31(3) 南方医科大学学报（J South Med Univ ） ·499 · ·基础研究· Gluc-Fluc 双荧光素酶质粒转染MB49 细胞后荧光表达特性 张信基，石小军，孙鹏宇，张哲欢，付昕阳，谭万龙 南方医科大学南方医院泌尿外科，广东广州510515 摘要：目的利用生物发光成像技术对Gluc-Fluc 双荧光素酶质粒转染MB49 膀胱癌细胞后双荧光表达量变化特性进行研 究。方法 用pAAV2neo-Gluc 和pAAV2neoCAG-Gluc-2A-Fluc 分别转染MB49 细胞，利用荧光照度计来研究双荧光素酶 质粒中Gluc、Fluc 的特性；利用体外活体成像系统对双荧光素酶质粒Gluc-Fluc 转染MB49 膀胱癌细胞后荧光表达情况的 检测。结果 荧光照度计检测结果显示：Gluc 随着细胞数的增多或时间的延长，荧光表达量呈相应的增加。Fluc 随细胞数 目的增多，荧光表达量增加；但随时间的延长，荧光表达量变化不大。体外活体成像结果显示：Gluc-Fluc 双荧光素酶质粒 已转染入MB49 膀胱癌细胞，经过G418 加压筛选获得稳定表达的细胞株。结论 双荧光素酶基因的构建并未改变Gluc 的 自身荧光表达特性。转染双荧光素酶质粒的MB49 膀胱癌细胞，由于其Fluc 在活体成像时的定位优势和Gluc 易分泌、检 测灵敏度高的定量优势，为后期动态检测肿瘤生长变化以及评价药物治疗效果提供了一个可靠的基石和平台。 关键词：双荧光素酶；转染；活体成像；膀胱癌 中图分类号：Q291; R6 文献标志码：A 文章编号：1673-4254（2011）03-0499-05 Expression of Gluc-Fluc dual luciferase plasmid after transfection into MB49 bladder cells ZHANG Xin-ji, SHI Xiao-jun, SUN Peng-yu, ZHANG Zhe-huan, FU Xin-yang, TAN Wan-long Department of Urinary Surgery, Nanfang Hospital, Southern Medical University, Guangzhou 510515, China Abstract: Objective To investigate the expression characteristics of Gluc-Fluc dual luciferase plasmid after its transfection into MB49 bladder cells. Methods pAAV2neoCAG-Gluc-2A-Fluc and pAAV2neo-Gluc plasmids were separately transfected into MB49 cells via LipofectamineTM2000. The Gluc activity in the cell culture supernatant and the Fluc activity in the cells were detected by luminometer and Lumina Imaging system. Results The luminometer result showed that the activity of Gluc in the supernatant increased gradually in a cell number- and time-dependent manner, while Fluc activity in the cells increased with the cell number but not with time. The Lumina