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诊断酶学 教学目标与要求 掌握酶活性的国际单位定义；酶活性测定的连续监测法和定时法的概念、区别和结果的计算方法；酶偶联反应的在酶活性测定和酶法分析代谢物中的应用；以NAD（P）H为指示系统和色素原底物在酶活性测定中的应用；酶活性测定最适条件的概念和意义；酶试剂法分析代谢物中的平衡法和速率法原理和要求；同工酶的概念；IFCC推荐法测定临床常用诊断酶的测定原理和评价。 熟悉酶活性浓度和正常上限升高倍数的表示方法；酶活性测定的各种影响因素；各种酶活性测定条件的确定原则；NAD（P）H指示系统在酶法分析代谢物中的应用和该法的缺点，氧化酶系统在酶法分析代谢物中的应用和该法的缺点；免疫抑制法测定同工酶的原理。 了解酶蛋白质量测定的优点；底物或产物浓度的检测手段；电泳法测定同工酶的特点；定时法测定临床常用诊断酶的原理和评价。 本章主要内容 第一节 酶含量的表示方法 第二节 酶催化活性的测定方法 第三节 酶活性测定的影响因素与最适条 件的确定 第四节 代谢物的酶法测定 第五节 同工酶检测技术 第六节 临床诊断中常用血清酶及其同工 酶 血清酶的分类 血浆特异酶 :在血浆中发挥特定的催化作用的 酶.如凝血过程有关的酶、胆碱酯 酶（CHE）、铜氧化酶、 非血浆特异酶： 1.外分泌酶：来源于消化腺或其他外分泌腺的 酶 如α-淀粉酶（AMY）、 脂肪酶（LPS）、胃蛋白酶原 ALP、酸性磷酸酶（ACP） 2. 细胞内酶:指存在于各组织细胞中进行代谢的酶类 作为诊断酶应具备的条件： 特异性：在组织、器官分布相对专一性 灵敏度：⒈细胞内外酶浓度的差异 ⒉酶在细胞内定位与存在形式 ⒊酶蛋白分子量的大小 4.在血液中的半衰期 有理想的检测方法 血清酶变化的病理生理机制 合成异常 1.合成减少 2.合成增多或诱导作用 酶释放增加 是疾病时大多数血清酶增高 的主要机制 影响细胞酶释放量的因素: 1.细胞内外酶浓度的差异 2.酶的相对分子量 3.酶的组织分布 4.酶在细胞内的定位和存在形式 酶排出异常 血清酶的生理差异 性别:少数酶CK、ALP、?-GT 男女 年龄： 新生儿ALP 略 成人 1~5岁为成人的2~3倍 10~15岁为成人3~5倍 运动：激烈肌肉运动CK、LD、 AST、ALD、ALT等增高 妊娠： 其他： 如何提高酶活性检测质量？ 测定方法要统一，各实验室都应选择IFCC推荐法或中华医学会推荐的方法。 按照IFCC推荐法所规定的配制方法生产试剂，并提供本测定系统的酶类校正物。 各实验室的操作人员应合理编制分析仪参数 参加各地区组织的酶类室间质评工作，不断提升实验室的比对能力； 同工酶及亚型的检测 化学抑制法 免疫抑制法 热失活法 电泳法 亲和层析法 同工酶的概念和分类 同一种属中由不同基因或等位基因所编码的多肽链单体、纯聚体或杂化体，具有相同的催化作用，但其分子构成、空间构像、理化性质、生物学性质以及器官分布或细胞内定位不同的一组酶称为同工酶。 某些同工酶从组织进入体液后在蛋白酶作用下降解成不同的亚型（isoform），如CK-MB可分为MB1和MB2两个亚型，有报道提示亚型比同工酶更有价值。 原级同工酶:凡酶蛋白结构不同的同工酶 次级同工酶:酶蛋白结构相同但经加工或修饰后的同工酶称为或酶的多种形式。不管是原级同工酶还是酶的多种形式，由于它们在组织分布、细胞内定位、发生发育等方面都有可能存在明显差异，与总酶活性相比它具有更高的诊断特异性和诊断敏感度，所以没有必要进行严格分类。但在遗传学领域中以研究原级同工酶为主 一、化学抑制法 LD1 测定试剂盒多采用化学抑制法，原理是一定浓度某些化学试剂如750mmol/L的1，6-己二醇、240mmol/L的硫氰酸胍能有效地抑制LD2-LD5各种同工酶的活性，而LD1几乎不受抑制。 前列腺酸性磷酸酶（PACP）也可依据此原理测定。7.5mmol/L酒石酸盐的具有部分抑制PACP的能力，测定加入抑制剂前后酸性磷酸酶的活性差来反映PACP的活性。