酶联免疫吸附试验的影响因素.pptVIP

酶联免疫吸附试验的 影响因素 检验科 实验过程中的影响因素 一、标 本 血清标本 采血试管 1.使用非抗凝标本（血清）； 肝素抗凝血浆会增加OD值;EDTA、酶抑制剂(如NaN3)可抑制ELISA检测系统中辣根过氧化物酶活性; 2.最好使用一次性玻璃试管或真空采血管. 标本采集后，应先将标本37°放置 30-60分钟后采用3000r /min离心15-20分钟，取 上清液加样。 标本的离心 强行离心分离血清，会使血清中仍残留部分纤维蛋白原，在ELISA测定过程中可以形成肉眼可见的纤维蛋白块或附着在酶标板孔壁内使酶标记物不易洗掉，易造成假阳（阴）性结果。 标本的保存 1. 一周 ---- 2～4℃ 保存； 2. 超过一周 ---- 建议-20℃保存。 3. 冰冻血清融解后，蛋白质会出现局部浓 缩而分布不均，加样前应充分混匀。 标本的保存 4. 混浊或有沉淀的血清标本应先离心或 过滤，澄清后再检测。 5. 作多次检测，宜少量分装冰存; 6. 血清标本宜在新鲜时检测尽量避免细 菌污染。 溶血标本 1. ELISA以辣根过氧化物酶标记抗原或 抗体； 2. 红细胞破坏后可释放出大量的具有过 氧化物酶活性的血红蛋白； 3. 残留的过氧化物酶催化底物产生非特 性显色导致结果假阳性。 脂血标本 1. 脂质小粒粘附在反应孔内壁； 2. 非离子型洗涤剂很难洗掉反应板上干 扰性物质的非特异性吸附，引起吸光 度A值升高，易造成假阳性结果。 餐后抽血、高甘油三脂血症患者、标本离心时间、离心速度不合适等，都可使分离的血清标本中残留着大量的脂质小粒。 二、 试 剂 1.试剂盒保存于2-8℃ 2.使用前应先将检测试剂 盒放置室温平衡15-30 分钟，保证酶等液体的初始反应温度及 活性剂的溶解。 3.观察外包装和内组份有无漏液。 三、加 样 加样过程应注意： A. 加样不可太快； B. 要避免加在孔壁上部； C. 不可溅出； D. 避免产生气泡； E. 尽可能使用同一加样器，装紧枪 头，加样后充分混匀。 试剂的滴加 从滴瓶中滴加，应注意滴加的角度和速度。 滴加太快，很容易出现重复滴加或加在两孔之间的现象，这样就会在孔内的非包被区出现非特异吸附，从而引起非特异显色。 移液器的使用 量程的调节 1.从大体积调为小体积 2.从小体积调为大体积 在该过程中，千万不要将按钮旋出量程，否则会卡住内部机械装置而损坏了移液枪 枪头（吸液嘴）的装配 使劲地在枪头盒子上敲几下 —— 错误 将移液枪（器）垂直插入枪头中，稍微用力左右微微转动即可使其紧密结合 —— 正确 枪头卡紧的标志是略为超过O型环，并可以看到连接部分形成清晰的密封圈。 移液的方法 前进移液法 反向移液法 一般用于转移高粘液体、生物活性液体、易起泡液体或极微量的液体，其原理就是先吸入多于设置量程的液体，转移液体的时候不用吹出残余的液体。 重复操作移液法 适用于快速、简便地重复转移等量的同种液体。 全血移液法 移液的注意事项 1.吸取液体时，移液器保持竖直状态，将 枪头插入液面下1厘米。 注意吸液体时，一定要缓慢平稳的松开拇指，绝不允许突然松开，以防将溶液吸入过快而冲入移液器内腐蚀柱塞而造成漏气。 移液的注意事项 2.设定加样体积，不能大于加样枪标定的 移液范围 3.加样吸嘴的洁净和装配 4.吸取液体和排出液体动作都一定要慢。 移液的注意事项 5.加样枪严禁吸取有强挥发性、强腐蚀性 的液体（如浓酸、浓碱、有机物等） 6.不要用大量程的加样枪移取小体积的液 体，以免影响准确度。 移液