树脂切片上凋亡相关蛋白的免疫荧光共聚焦表达.docVIP

 树脂切片上凋亡相关蛋白的免疫荧光共聚 焦表达# 宋小峰1,2，任昊1，梁飞1，翟效月1** 5 10 15 20 （1. 中国医科大学组织学与胚胎学教研室，沈阳，110001； 2. 辽宁医学院组织学与胚胎学教研室，锦州，121001） 摘要：目的：探索树脂切片上凋亡相关蛋白的免疫荧光表达。方法：生后 14 天的小鼠肾脏 组织经过醛类前固定和锇酸后固定后树脂 812 包埋，1μm 半薄切片，采用不同浓度和时间 KOH 甲醇溶液蚀刻环氧树脂，随后高温高压加热以提高其抗原性，激光扫描共聚焦检测小 鼠肾脏凋亡相关蛋白 BCL-2 和 BAX 的表达。结果：BCL-2（绿色荧光）和 BAX（红色荧光） 特异地表达在肾小管的细胞质中，两个蛋白表达重叠的区域呈现黄色。偶有肾小管只表达 BCL-2 蛋白。结论：采用适当浓度和时间的 KOH 甲醇溶液蚀刻并高温高压修复抗原，凋亡 相关蛋白是可以在树脂切片上通过免疫荧光染色而表达的。 关键词：树脂切片；免疫荧光共聚焦；凋亡相关蛋白；小鼠 中图分类号：R329.1 The confocal immunofluorescence microscopy expression of protens relating to apoptosis on epoxy sections SONG Xiaofeng1,2, REN Hao1, LIANG Fei1, ZHAI Xiaoyue1 (1. Deparment of Histology and Embryology, China Medical University,Shenyang,110001; 2. Deparment of Histology and Embryology, Liaoning Medical College, Jinzhou,121001) Abstract: Objective: In this paper, we proceed the confocal immunofluorescence microscopyexpression of proteins relating to apoptosis on resin sections. Methods: To improve 25 30 35 40 immunoreaction, the epoxy resin was etched with debita spissitudine alkali solutions and antigenicity by high temperature and high pressure. Soon after, the expression of BCL-2 and BAX was detected. Result: One tubule cells showed the double staining of BCL-2 and BAX, the other tubule cells only showed the staining of BCL-2. Conclusion: The confocal immunofluorescence microscopy expression on epoxy sections was feasible, and this technique conserved integral tissue architecture. Key words: epoxy section; the confocal immunofluorescence microcopy; proteins relating to apoptosis; mouse 0 引言 树脂包埋的组织往往比石蜡或冰冻包埋的组织保存更好的形态结构，同时由于其硬度 高，易被制备成半薄或超薄切片而成为亚细胞结构研究最常用的制备方法。但在树脂切片制 备过程中采用的醛类和锇酸固定剂往往与细胞内的抗原共价结合而削弱其抗原性[1]，再加上 树脂 812 包埋方法覆盖了整个抗原，因而限制了细胞内蛋白的表达及定位的研究。20 世纪 70 年代，Maxwell 等人采用适当浓度的强碱溶液蚀刻环氧树脂成功地进行了多种组织学染色 [2] 基金项目：中国博士后科学基金（N.20070420206）；中国博士后科学基金特别资助基金（N.200801399）； 高等学校博士学科点专项科研基金（N.200801590016） 作者简介：宋小峰（1973-），女，副教授，主要研究方向：肾微细结构三维重建 通信联系人：翟效月（1963-）女，教授，主要研究方向：肾微细结构三维重建. E-mail: zhaixy@mail.cmu.edu.cn -1-