玉米AFB2基因转化番茄的功能研究.docVIP

 玉米 AFB2 基因转化番茄的功能研究# 杨春文，唐宁，李正国** （重庆大学生物工程学院基因工程研究中心，重庆 400045） 5 10 摘要：通过生物信息学分析从玉米基因组数据库中筛选出一条全长 cDNA 序列命名为 ZmAFB2， GenBank 登录号 NM_001143136.1。通过设计特异引物克隆该基因，ZmAFB2 全长 1,722 bp。 定量 RT-PCR 结果表明，该基因在玉米的根、茎、叶中均有表达，但在茎中的表达最强。为 了 进 一 步 研 究 玉 米 ZmAFB2 的 功 能 ， 构 建 了 玉 米 ZmAFB2 基 因 的 超 表 达 载 体 pCAMBIA-35s-AFB2，通过农杆菌介导转化番茄，经 GUS 染色和定量 PCR 鉴定，共获得 3 株转 基因植株，其中 2 个株系无籽，定量 RT-PCR 结果表明 IAA9,ARF8 表达量递减，ARF2 表达量 明显增强。结果表明 ZmAFB2 对植物果实发育具有重要的调控作用，参与了与 TIR1 不同的调 控路径，通过激活 ARF2 来调控植物的生长发育。 关键词：分子生物学；ZmAFB2；生长素受体；克隆；超表达；定量 RT-PCR 中图分类号：S641.2 15 Function Analysis of over-expression zea mays AFB2 Gene in transgenic tomato Yang Chunwen, Tang Ning, Li Zhengguo (Genetic Engineering Research Center, Bio-Engineering College, Chongqing University, 20 25 30 35 40 ChongQing 400045) Abstract: A homologue of AFB2 gene, ZmAFB2 (GenBank: NM_001143136.1), has been cloned using the gene special primer from maize (Zea mays L.). It contains a 1,722 bp open reading frame (ORF) encoding 574 amino acid residues. Quantitative PCR analysis showed that ZmAFB2 expressed in all tissue in maize, including root, stem and leaf, but mainly in stem. To further investigate the function of ZmAFB2, we constructed ZmAFB2 over-expression vector pCAMBIA-35s-AFB2, and transformed into tomato (Solanum lycopersicum) by Agrobacterium-mediated transformation and through the identification of GUS stain and quantity PCR, we got three transgenic tomato lines(line2,line3 and line4). While line2 and line4 were no seeds, quantitative PCR showed IAA9 and ARF8 expression levels were declined, whereas ARF2 expression up-regulated. Our result indicated that ZmAFB2 may take part in another pathway in auxin regulation different from TIR1, and have an important role in fruit development by activating the auxin response factor 2 (ARF2). Keywords: Molecular biology; AFB2; Auxin receptor; Clone; Overexpression; Quantity PCR 0 引言 在真核生物中，泛素 26S 蛋白降解途径作为重要的蛋白降解途径。对相关调控因子的蛋 白水平进行转录后调控，从而影响细胞周期、信号传导、转录、胁迫应答和预防病原体等重 要生理过程[1]该过程中靶蛋白泛素化后被