siRNA干扰CASK表达对INS-1细胞胰岛素分泌的影响.docVIP

 siRNA 干扰 CASK 表达对 INS-1 细胞胰岛素 分泌的影响 李原1，陈鸿1，朱云霞2，杨楠2，王尧1** 5 10 15 20 25 （1. 东南大学附属中大医院内分泌科，南京 210009； 2. 南京医科大学江苏省人类功能基因组重点实验室，南京 210029） 摘要：目的：利用小分子 RNA 干扰片段（siRNA）抑制大鼠胰岛细胞系 INS-1 中钙／钙调 蛋白依赖性丝氨酸蛋白激酶（CASK）基因的表达，观察其对钾离子刺激胰岛素分泌（KSIS） 功能的影响。方法：利用脂质体 Lipofectamine2000 将针对靶基因 CASK 合成的五条特异性 siRNA 片段（siCASK-1，2，3，4，5）及对照组片段转染 INS-1 细胞。实时定量 PCR 及 Western blot 检测 CASK 基因表达变化，进行有效干扰片段的筛选。放射免疫法检测钾离子 刺激 INS-1 细胞后胰岛素分泌量的改变。结果：转染 100nM siRNAs 48h 后，INS-1 细胞中 CASK 基因表达明显降低（P0.01）, KSIS 功能显著降低(P0.01)。结论：靶向 siRNA 可以 特异性地抑制 INS-1 细胞中 CASK 基因表达，从而抑制钾离子诱导的胰岛素分泌。 关键词：内科学；CASK；转染；siRNA；KSIS 中图分类号：R587.1 Effect of small interfering RNA targeting CASK on the insulin secretion of pancreatic INS-1 cells LI Yuan1, CHEN Hong1, ZHU Yunxia2, YANG Nan2, WANG Yao1 (1. Department of Endocrinology, Zhongda Hospital, Southeast University, Nanjing 210009; 2. Key laboratory of Human Function Genomics of Jiangsu Province,Nanjing Medical University, Nanjing 210029) Abstract: Objective To inhibit the expression of calcium/calmodulin-dependent serine protein kinase (CASK) gene in INS-1 rat insulinoma cells by siRNA and observe its effect on potassium-stimulated insulin secretion (KSIS).Methods siRNA targeting CASK gene （siRNA-1,2,3,4,5）and non-specific siRNA(control group) were chemically synthesized and then transfected into the rat pancreatic INS-1 cells using Lipofectamine 2000.The interfering efficiency 30 35 40 of the siRNAs was assessed using Real-time PCR and Western blotting. Results After transfection with 100 nmol／ L siRNAs for 48 h, the expression of CASK gene in INS-1 cells was inhibited(P0.01)，and the KSIS decreasd significantly(P0.01). Conclusion The siRNAs targeting CASK mRNA can effectively down-regulate CASK expression, which leads to the inhibition of potassium-stimulated insulin secretion.) Key words: internal medicine；CASK；transfection；siRNA；KSIS 0 引言 钙／钙调蛋白依赖性丝氨酸蛋白激酶（ calcium/calmodulin-dependent serine protein kinase，CASK）是一种支架蛋白，利用其多蛋白结构域，可结合不同的靶蛋白，参与构建 细胞骨架、细胞连接、信号转导和基因