人工脂质体染色方案的探究.docVIP

 人工脂质体染色方案的探究# 彭方1，苏伟2，阚文静2，王邵华2* （1. 武汉大学生命科学学院典型物保藏中心，武汉 430072； 5 10 2. 武汉大学生命科学学院，武汉 430072） 摘要：在一定的温度、渗透压、离子强度条件下，利用脂质体材料 L-α-phosphatidylcholine 制备人工脂质体，借助结晶紫染液、美蓝染液、复红染液、钼蓝染液、苏丹黑染液，对脂质 体进行染色，结果表明经结晶紫染色后的脂质体在光学显微镜下具有形态大小分明、数量多、 立体结构清晰等特征。为了优化染色方案，进一步获取最佳染色配比，实验进行了梯度染色， 得到了背景清晰，脂质体立体结构明显的最佳染色方法，解决了光学显微镜下不易分辨脂质 体的问题，为后续实验的开展奠定基础。 关键词：人工脂质体；染色；优化 中图分类号：R94 文献标志码： A 15 20 25 30 35 40  The research on staining of artificial liposomes PENG Fang1, SU Wei2, KAN Wenjing2, Wang Shaohua2 (1. China center for typical culture collection, college of life sciences, Wuhan University, WuHan 430072; 2. College of life sciences, Wuhan University, WuHan 430072) Abstract: Artificial lipsomes was performed under appropriate conditions such as temperature, osmotic pressure, ionic intensity. The results showed that artificial lipsomes which stained by crystal violet staining solution characterised as legible shapes and stereochemical structures, numerous quantity under optical microscope with dyeing of crystal violet staining solution, methylene blue solution, basic fuchsin solution, molybdenum blue solution, sudan black solution. The gradient dyeing was investigated, demonstrating that proper proportion was optimum resulting from optimizing the staining model. The research made a solution to distinguish artificial lipsomes on the optimal microscope, which was in favour of subsequent experiment. Keywords: artificial lipsomes; staining; optimizing 0 引言 人工脂质体是一种人工膜体系，可以形成单层膜，也可以是连续的双层或多层复合脂质 组成的人工小球囊，直径不等,约 25~100 nm。科研工作者利用乙醇注入法[1]、薄膜分散法、 超声波分散法[2]、逆相蒸发法[3]、冷冻干燥法等多种方法成功地制备了人工脂质体。脂质体 可以和细胞膜融合，将药物或者小分子送入细胞内部，应用于转基因或药物制备。因此，脂 质体是一种良好的生物学材料，被广泛应用于生物领域，医学领域[4-5]和药学领域[6-8]。1976 年德国的马普生物物理研究所创建了膜片钳技术[9-10]，利用双电极钳制细胞膜电位，记录离 子通道的离子电流，反映了细胞膜单一的或多个的离子通道分子活动。膜片钳技术广泛地应 用到平面双分子层、脂质体等人工标本上，对细胞膜离子通道进行性质鉴定及动力学研究， 以阐述离子通道与细胞膜相互作用的机制，因而对脂质体的形态、结构有较高的要求。 脂质体的制备对后续定性和定量实验有着重要作用，所以，在制备脂质体的过程中，研 究者需要找到一种观察脂质体的形态特征，预测脂质体制备效果的方法。传统研究方法中， 电子显微镜成为观察脂质体的一种方法，但具有一定的局限性，只能观察平面结构，成本较 高，且不能随时观察。本研究利用染色的方法