山羊SEPP1基因的克隆、功能特征及组织表达的研究.docVIP

 山羊 SEPP1 基因的克隆、功能特征及组织 表达的研究# 王茜，张春香** 5 10 15 20 25 30 35 40 （山西农业大学动物科技学院，山西 太谷 030801） 摘要：【目的】研究山羊 SEPP1 基因的编码区全序列、功能特征及组织表达特点。【方法】 利用 RT-PCR 技术，克隆山羊睾丸 SEPP1 基因完整编码区序列；应用生物信息学软件对其序 列进行相关分析；应用实时荧光定量 PCR 方法研究 SEPP1 在山羊不同组织和睾丸不同发育阶 段 mRNA 表达情况。【结果】成功克隆了长度为 1151 bp 的山羊睾丸 SEPP1 基因完整编码区 序列，并提交 NCBI，登录号为 JQ 316673。通过生物信息学分析得出，序列编码 347 个氨基 酸，1-21 位氨基酸为信号肽序列，具有硒蛋白特有的硒代半胱氨酸插入序（SECIS），发现 4 个潜在的 N-糖基化位点，没有 O-糖基化位点，存在潜在的磷酸化位点，没有发现跨膜区 域，山羊 SEPP1 氨基酸序列与牛的同源性最高，相似性为 95.8%；SEPP1 在肝脏中的表达量 最高；SEPP1 在山羊睾丸不同发育阶段的 mRNA 表达呈阶段性表达，与精子发生过程紧密相 连。【结论】SEPP1 蛋白是作为硒转运的重要蛋白。 关键词：山羊；SEPP1；基因克隆；生物信息学 中图分类号：S814 Cloning, characterization, and expression analysis of goat (Capra hircus)SEPP1 Wang Qian, Zhang Chunxiang (Shanxi Agricultural University, ShanXi TaiGu 030801) Abstract: In this paper the full-length cDNA was assembled by the two obtained SEPP1 sequences. The full-length cDNA of SEPP1 was 1511 bp long, including 5- and 3-untranslated regions and a 1041-bp ORF encoding a 347-amino-acid protein. The complete cDNA sequence of the Sepp1 gene was submitted to NCBI GeneBank (accession number JQ 316673). The deduced SEPP1 amino acid sequences showed that the predicted protein has an estimated 37.5 kDa molecular weight and with an isoelectric point (pI) of 7.85. The BLAST analysis showed that the entire nucleotide sequence of SEPP1 gene had 95.8% homology with bovine. The mRNA expression of Sepp1 in different tissues was analyzed by real-time PCR. The highest rate of transcription was observed in liver (P0.001), very low expression was detected in the muscle (P0.001). Sepp1 mRNA expressed variously during the different age. Keywords: Goat; SEPP1; Gene Clone; Bioinformatics 0 引言 硒蛋白 P（SEPP1，Sel P）是血浆中位于谷胱甘肽过氧化物酶 3（GPx3）之后的第二主 要的硒蛋白，包含有 50%的血浆硒。SEPP1 不同于其他一些硒蛋白，因为其每个蛋白分子 内有多个硒代半胱氨酸（Sec）残基，比如人和鼠 SEPP1 cDNA 中包含有 10 个 Sec 残基，斑 马鱼 SEPP1 cDNA 中包含有 17 个 Sec 残基。硒半胱氨酸掺入硒蛋白是在基因阅读框架内 UGA 指导下完成[1,2]，而 UGA 在一般正常情况下为终止密码子。硒蛋白翻译过程中之所以 通过终止密码子 UGA 是因为其 mRNA 的 3’非编码区有保守的茎环结构，又称硒半胱氨酸 插入序列[3,4]。根据很多 SEPP1 敲除小鼠