褐球固氮菌和荧光假单胞菌原生质体制备条件的研究.pdfVIP

第 19 卷 　第 6 期 山 东 科 学 Vol. 19 　No. 6 2006 年 12 月 SHANDONG SCIENCE Dec. 2006 ( ) 文章编号 2006 褐球固氮菌和荧光假单胞菌 原生质体制备条件的研究 1 1 ,2 ,3 1 1 1 1 张广志 ,杨合同 ,李纪顺 ,陈凯 ,扈进东 ,黄玉杰 ( 1. 山东省科学院中日友好生物技术研究中心 ,山东省应用微生物重点实验室 ,山东 济南 250014 ; 2. 山东理工大学生命科学院 ,山东 淄博 255049 ;3. 山东省科学院生物研究所 ,山东 济南 250014) 摘要 :为了利用原生质体融合技术获得同时具备固氮、解磷、抑病等活性的多功能菌株 ,本文对褐球固氮菌 A41 和荧光假单胞菌 P32 原生质体的制备条件进行了研究。通过对菌龄、酶解温度、酶浓度、酶解时间等影响 因素的正交实验确定了褐球固氮菌A41 和假单胞菌 P32 原生质体制备的最佳条件。实验结果表明 , 固氮菌 A41 最佳制备条件为菌龄 20h 、酶解温度37 ℃、酶浓度 3mgmL 、酶解时间45min ;假单胞菌 P32 最佳制备条件为 菌龄 20h 、酶解温度37 ℃、酶浓度2mgmL 、酶解时间30min 。 关键词 : 固氮菌;假单胞杆菌 ;原生质体 ;正交实验 中图分类号:S144. 1 　　　　　文献标识码 :A 生态农业的发展对高效微生物肥料特别是对高效多功能微生物肥料的需要日益迫切。目前国内外的多 功能微生物肥料多为复合型 ,即是多个菌株的混合物 , 由于多菌株复合微生物肥料生产工艺复杂,菌株间存 活能力不同 ,生产过程难以控制 ,肥料质量难以保证 ,从而严重影响了整个生物肥料行业的健康发展。 通过原生质体融合技术将具有互补功能的菌株进行细胞融合 ,获得多功能菌株 ,并进一步研发多功能微 生物肥料 , 以提高农作物产量、改善品质、提高抗逆性,是实现高产稳产优质农业的有效措施之一。褐球固氮 菌A41 具有较高的固氮活性 ;荧光假单胞菌 P32 同时具有解磷、抑病活性 ,均具有重要的研究价值。本文通 过对菌龄、酶浓度、酶解时间等影响因素的正交实验 ,确定了两个菌株原生质体制备与再生的最佳条件 ,为下 一步采用原生质体融合获得固氮、解磷、抗病等多功能菌株奠定基础。 1 　材料与方法 1. 1 　材料 1. 1. 1 　供试菌株 ( ) (本实验室分离保存) Azotobacter Chrococcum 41 本实验室研究用菌株 ; Psedomonas fluorescens 32 。 1. 1. 2 　培养基 ( ) A41 :基本培养基 MM : K HPO 0. 64g ,KH PO 0. 16g ,MgSO ·7H O 0. 2g ,NaCl 0. 2 g ,CaSO ·2H O 0. 05g , 2 4 2 4 4 2 4 2 ( )