硕士学位论文多头带绦虫Tmls基因的克隆与原核表达.docVIP

硕士学位论文 多头带绦虫Tmls基因的克隆与原核表达 目录 中文摘要……，……‘……，……I 英文摘要……，……‘…，……‘……n 目录……，……，……，.……i 第一章文献综述……，·································……1 动物绦虫坳病疫苗研究进展···············································……1 l天然抗原……，……，……‘……1 1.1六钩拗及其分泌/排泄物二，……，…，……，…，……1 1‘2原头拗及其组分抗原..…，二‘··························································……2 1.3细胞苗……，……，……3 2基因工程疫苗……，·……3 2.2重组蛋白疫苗·······················……4 2.2.145w家族……，……，……、.…4 2.2.216kDa和 18kDa抗原……，……，··，·······，························……6 2.2.3Eg95和Em95··············································……7 2.2.4多肤疫苗……，·····……8 2.3核酸疫苗.……，，二，……，……，……，……10 3疫苗研究展望..…，，……，……，·····..·····.……12 4本试验的目的意义··..，·····························……12 第二章多头带绦虫Tmls抗原基因的克隆和原核表达..…，……13 1材料和方法……，……13 1.1材料……，.，……、，，……13 1.1.1虫株和实验动物……，……13 1.1.2主要试剂.……，……‘.，.，……13 1.1.3菌株及质粒载体……，··········································……14 1.1.4主要仪器设备……14 1.1.5培养基及常用液体的配制……，……14 1.1.6主要生物信息数据库和计算机软件……‘……，.……16 1.2试验方法……，……，..……，……16 1.2.1多头带绦虫虫卵的收集和六钩坳总RNA的提取……。……16 1.2.2多头带绦虫Tmls基因的克隆……，……17 l.2.3Tm18基因原核表达载体构建……，……，……20 1.2.4重组pGEX一4T-1一Tmls质粒在大肠杆菌中的诱导表达……21 1.2.5重组蛋白的纯化·····································，····……23 1.2.6重组蛋白的免疫印迹(Westem一Blotting)检测……，……24 脚 1.2.7重组蛋白免疫小鼠的抗体水平的检测……25 2结果……‘……26 2.1多头带绦虫Tmls基因的克隆……，……26 2.1.1多头带绦虫Tmls的扩增和克隆质粒的鉴定……26 2.1.2多头带绦虫Tmls基因测序鉴定……，……26 2.1.3多头带绦虫Tmls基因的序列分析.，……，……，……26 2.1.4多头带绦虫Tmls基因的蛋白质生物信息学分析……‘……29 2.2重组Tmls基因的亚克隆……34 2.2.1重组Tmls基因片段的扩增.，……‘……34 2.2.2pMD18一T-rTmls质粒的鉴定……34 2.3pGEX一4T-rTmls重组表达质粒的构建与鉴定……34 2.4pGEX一4T-rTmls重组质粒表达产物的SDS一PAGE电泳分析…‘……‘.34 2.5重组蛋白的纯化和免疫印迹检测……，……‘...……36 2.6重组蛋白免疫小鼠的抗体水平的检测……，……，……37 2.6.1小鼠血清中lgG的检测结果……，……37 2.6.2小鼠血清中lgGI的检测结果……，……38 2.6.3小鼠血清中IgGZa的检测结果……。……39 2.6.4小鼠血清中IgE的检测结果……40 2.6.5小鼠血清中IgM的检测结果……41 3讨论二，……42 3.1关于绦虫的18kDa抗原……，……‘……42 3.2多头带绦虫的Tmls抗原······...·······················……42 3.3多头带绦虫Tm18的表达.…，……，.，.，...……，……。……43 3.4重组抗原的免疫活性……，，……，.···········································……44 4结论与创新点·············，···一44 4.1结论..…，.…，……，44 4.2创新点……，.…‘.…，.…45 参考文献……，……，..…‘.……，……，……‘46