2025年免疫学免疫细胞流式细胞术操作规范检测试题及答案解析.docxVIP

2025年免疫学免疫细胞流式细胞术操作规范检测试题及答案解析

一、单项选择题（每题2分，共20分）

1.外周血T细胞亚群检测时，最适宜的抗凝剂选择是：

A.EDTA-K2

B.肝素锂

C.枸橼酸钠

D.草酸钠

答案：B

解析：肝素锂通过抑制凝血酶活性抗凝，对白细胞表面抗原（如CD3、CD4、CD8）的影响较小，是T细胞亚群检测的首选抗凝剂。EDTA-K2可能导致部分细胞表面抗原构象改变（如CD45），影响检测结果；枸橼酸钠（ACD）多用于血小板检测；草酸钠因毒性已被淘汰。

2.流式细胞术检测免疫细胞时，红细胞裂解液的最佳作用条件是：

A.37℃孵育15分钟

B.室温（22℃）孵育5分钟

C.4℃孵育30分钟

D.37℃孵育30分钟

答案：B

解析：红细胞裂解需快速且温和，避免损伤白细胞表面抗原。室温（22±2℃）孵育5-10分钟是标准条件，过长（如30分钟）或高温（37℃）可能导致白细胞膜破坏，影响表面标记物表达；4℃裂解效率不足，易残留红细胞。

3.荧光抗体染色时，“同型对照”的主要作用是：

A.校正仪器电压

B.排除非特异性Fc受体结合

C.确定阳性细胞阈值

D.验证荧光素稳定性

答案：B

解析：同型对照指与检测抗体同种型（IgG1、IgG2a等）、荧光素一致但无特异性靶抗原的抗体，用于评估非特异性结合（如Fc受体介导的非特异性染色），而非直接确定阳性阈值（需结合阴性对照和阳性细胞群分布）。

4.流式细胞仪每日开机后需进行的核心校准步骤是：

A.细胞计数准确性校准

B.荧光补偿调节

C.鞘液压力检测

D.标准微球（如SpherotechRainbowBeads）的光散射和荧光校准

答案：D

解析：每日开机后需使用校准微球（如RainbowBeads）校准仪器的前向散射（FSC）、侧向散射（SSC）及各荧光通道的灵敏度和线性，确保不同时间检测结果的可比性。荧光补偿需在实验设计阶段根据抗体组合调节，非每日必做；细胞计数准确性依赖样本处理和上样体积控制。

5.检测NK细胞（CD3?CD56?）时，若样本中粒细胞比例异常增高（80%），最可能影响的参数是：

A.FSC/SSC设门的准确性

B.荧光信号强度

C.抗体孵育效率

D.补偿值计算

答案：A

解析：粒细胞（如中性粒细胞）的FSC（体积）和SSC（颗粒度）与淋巴细胞重叠较少，但比例过高时，设门时易误将粒细胞划分为淋巴细胞区域（R1门），导致NK细胞（主要分布于淋巴细胞群）的计数偏差。

6.流式细胞术检测中，“细胞活率”的常用检测指标是：

A.CD45?细胞比例

B.7-AAD或PI的阴性率

C.AnnexinV阳性率

D.CD3?细胞绝对计数

答案：B

解析：7-氨基放线菌素D（7-AAD）或碘化丙啶（PI）为膜通透性染料，仅进入死细胞并结合DNA，活细胞呈阴性。CD45标记白细胞，但无法区分死活；AnnexinV标记早期凋亡细胞（膜磷脂外翻），非活率直接指标。

7.荧光素PE（藻红蛋白）的最佳激发光和检测通道是：

A.488nm激光激发，585/42nm滤光片

B.633nm激光激发，660/20nm滤光片

C.405nm激光激发，525/50nm滤光片

D.561nm激光激发，585/42nm滤光片

答案：A

解析：PE的最大激发波长为488nm（氩离子激光），发射峰约575nm，常用585/42nm滤光片（FL2通道）检测。561nm激光（黄光）可激发PE但非最佳；633nm（红光）激发APC，405nm（紫光）激发V450等。

8.流式样本上样前，需用300目筛网过滤的主要目的是：

A.去除血小板

B.减少细胞团块

C.降低鞘液污染

D.提高细胞浓度

答案：B

解析：组织消化或全血处理后易形成细胞团块，团块会堵塞流式细胞仪的喷嘴（直径约70-100μm），导致检测中断或信号异常（如双体峰）。300目筛网（孔径约50μm）可有效过滤团块，保留单细胞悬液。

9.检测B细胞（CD19?）时，若抗体孵育时间过长（60分钟），最可能出现的问题是：

A.荧光淬灭

B.非特异性结合增加

C.细胞死亡

D.补偿值漂移

答案：B

解析：抗体孵育时间过长（30分钟）可能导致非特异性结合（如抗体与细胞表面Fc受体或电荷非特异性吸附）增加，需严格按说明书控制时间（通常15-30分钟）。荧光淬灭主要与光照和保存时间相关；细胞死亡多因孵育温度（如3