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《动物疫病检验技术》

布氏杆菌病的试管凝集试验

学习资料单

布氏杆菌病的试管凝集试验

布氏杆菌病简称布病，是由布鲁氏菌引起的人畜共患性全身传染病，

布病的临床特点主要有：

怀孕母牛常于妊娠6-8个月发生流产、产死胎或弱胎，流产后常排出污秽的灰色或棕色恶露。有的发生胎衣滞留，出现子宫内膜炎，阴道流出不洁棕红色渗出物。

乳腺受到损害引起泌乳量下降，重者可使乳汁完全变质，乳房硬化，甚至丧失泌乳能力;也有伴发关节炎。

公牛主要表现为睾丸和副睾丸炎。

孕羊流产，可发关节炎和滑液囊炎。公羊发生睾丸炎。

猪主要为流产、子宫炎和不孕，产死胎及弱仔。公猪发生急性或慢性睾丸炎或副睾炎。主要病理变化特点可见胎儿败血症变化，组织器官(如：子宫、乳房、胎衣、睾丸及副睾)的炎性反应(如：渗出、坏死、化脓或干酪化)及细胞增生形成肉芽肿(结节由上皮样细胞及巨噬细胞组成)至瘢痕化、家畜感染后会出现流产、早产、不孕。孕畜流产，多发生于妊娠后期。母牛流产后常胎衣滞留。公畜常见睾丸炎和附睾炎，不育。此外家畜还可见乳房炎、关节炎和滑液囊炎。人可通过与病畜或带菌动物及其产品的接触、食用未经彻底消毒的病畜肉、乳及其制品而感染发病。

人感染布氏杆菌病后，病菌在人体中产生菌血症和毒血症，累及各个器官，慢性期多侵及脊柱和大关节，运动系统除侵及脊柱外还可侵及髋、膝、肩关节。人感染后全身乏力，丧失劳动力，因此也俗称懒汉病。布病的诊断除根据上面的临床症状进行诊断外，主要还是通过实验室诊断进行确诊，目前，布病的实验室诊断可以通过平板凝集试验和试管凝集试验来进行，平板凝集试验我们已经在鸡白痢全血平板凝集试验中讲述过，这里就不重复，本节我们来学习布氏杆菌病的试管凝集试验。

试管凝集试验多用于半定量和定量试验。

试管凝集试验是在在试管中进行

它的特点：准确、耗时

它的用途：定量试验，如诊断布氏杆菌病，测定抗体的凝集价。

试验原理

常用已知一定量和抗原（细菌、细胞等）与系列受稀释的待检血清混合，在保温放置后观察结果，以判定待检血清有无相应的抗体及其效价。试管凝集试验为半定量试验方法，在微生物学检验中常用已知细菌作为抗原液与一系列稀释的待检血清混合，保温后观察每管内抗原凝集程度，通常以产生50%凝集现象的最高稀释度作为血清中抗体的效价，亦称为滴度。

[设备和材料]

灭菌采血清试管，灭菌小试管，小试管架，(0.2ml、lml、5ml、10ml)的清洁灭菌吸管，0.9％石炭酸生理盐水，布鲁氏菌试管凝集抗原，玻璃笔等。

[操作方法]

1．操作方法取反应管5支，立于试管架上，用玻璃笔在每支试管上标记血清号和试管号；用5ml吸管吸取0.5％石炭酸生理盐水于血清稀释管内加入2.3ml，以后四管均并加入0.5ml；取被检血清0.2ml加入第一管混匀，吸取1.5ml，弃于消毒缸内，再吸0.5ml于第二管混匀，再从第二管吸0.5ml于第三管，如此类推，到最后一管混匀后吸0.5ml弃去；然后每管加入1：20石炭酸生理盐水稀释的抗原用0.5ml播匀；如此，每管血清稀释倍数依次为1：25、1：50、I：100、1：200、1：400，置37℃4～10h，再置室温18～24h。观察记录结果。与此同时，每批凝集试验应有阳性血清(1：800)、阴性血清(1：25)对照，方法与被检血相同。抗原对照是抗原0.5ml加盐水0.5ml。检查羊血清时以含有0.5％石炭酸的10％盐水代替生理盐水。

2．记录反应抗原完全凝集而沉淀，液体完全遣明，以++++表示；75%抗原被凝集而沉淀，液体浮悬25％抗原而稍浑浊，以+++表示；50％抗原被凝集而沉淀，液体浮悬50%抗原而半透明，以++表示；25％抗原被凝集而沉淀，液体浮悬75％抗原而较浑浊，以+表示；抗原完全不凝集，以-表示.

出现50％以上的凝集的最高血清稀释度．就是这份血清的凝集价，应制备一支50％比浊管。方法是取0．25m1已稀释抗原于小试管内，加所用盐水0．75ml混合均匀。

3．判定标准羊、猪血清疑集价1：50以上阳性，1：25为可疑；大家畜和人1：100以上为阳性；1：50为可疑。可疑反应家畜，再过半个月后重检。重检如仍为可疑可依据畜群具体情况判定，即畜群中留有其他阳性病畜则该可疑牲畜判为阳性，若畜群中从无阳性畜，则判为阴性。

同学们，我们介绍了布氏杆菌病的临床症状、病理变化及试管凝集试验检测方法和判定标准，为保证大家的健康，预防布病的发生，在这里给大家提几个小建议：第一点保持环境安静整洁，每天通风，避免强光刺激及对流风直吹。第二点：生活要有规律，保证足够睡眠。注意劳逸结合，避免过度劳累。第三点：保持口腔、皮肤清洁干燥，避免继发感染。第四点：养成良好的饮食习惯，注意饮食卫生，生熟食物分开切