液相色谱仪流动相的选择.pdfVIP

规律1:由强到弱：一般先用90%的乙睛（或甲醇）/水（或缓冲溶液）进行试验，

这样以很快地得到分离结果，然后根据出峰情况调整有机溶剂（乙睛或甲醇）的

比例。

规律2:三倍规则：每减少10%的有机溶剂（甲醇或乙睛）的量，保留因子约增

加3倍，此为三倍规则。这是一个聪明而又省力的办法。调整的过程中，注意观

察各个峰的分离情况。

规律3:粗调转微调：当分离达到一定程度,应将有机溶剂10%的改变量调整

为5%,并据此规则逐渐降低调整率，直至各组分的分离情况不再改变。

流动相

1.流动相的性质要求

一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得

到纯品和低毒性等特征。

选择流动相时应考虑以下几个方面：

①流动相应不改变填料的任何性质。低交联度的离子交换树脂和排阻色港填

料有时遇到某些有机相会溶胀或收缩，从而改变色谱柱填床的性质。碱性流动相

不能用于硅胶柱系统。酸性流动相不能用于氧化铝、氧化镁等吸附剂的柱系统。

②纯度。色谱柱的寿命与大量流动相通过有关，特别是当溶剂所含杂质在柱

上积累时。

③必须与检测器匹配。使用uV检测器时，所用流动相在检测波长下应没有

吸收，或吸收很小。当使用示差折光检测器时，应选择折光系数与样品差别较大

的溶剂作流动相，以提高灵敏度。

④粘度要低（应2cp）。高粘度溶剂会影响溶质的扩散、传质，降低柱效，

还会使柱压降增加，使分离时间延长。最好选择沸点在100℃以下的流动相。

⑤对样品的溶解度要适宜。如果溶解度欠佳，样品会在柱头沉淀,不但影响

了纯化分离,且会使柱子恶化。

⑥样品易于回收。应选用挥发性溶剂。

2.流动相的pH值

采用反相色谱法分离弱酸3（pKa7）或弱碱7（pKa8）样品,通过

调节流动相的pH值，以抑制样品组分的解离，增加组分在固定相上的保留，并

改善峰形的技术称为反相离子抑制技术。对于弱酸，流动相的pH值越小，组分

的k值越大，当pH值远远小于弱酸的pKa值，弱酸主要以分子形式存在；

对弱碱，情况相反。分析弱酸样品，通常在流动相中加入少量弱酸,常用

50mmol/L磷酸盐缓冲液和1%醋酸溶液;分析弱碱样品，通常在流动相中加

入少量弱碱，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和30mmol/L三乙胺溶液。

注：流动相中加入有机胺可以减弱碱性溶质与残余硅醇基的强相互作用，减

轻或消除峰拖尾现象。所以在这种情况下有机胺（如三乙胺）又称为减尾剂或除

尾剂。

3如何选择缓冲液PH值

在选择缓冲液PH值之前，应先了解被分析物的Pka，高于或低于Pka两个

PH值单位的，有助于获得好的、尖锐的峰从HH公式:PH=Pka+log[（A-]/[A]）

得知，溶液PH值高于或低于Pka两个单位，化合物中99%以一种形式存在,

而一种形式存在的化合物才能获得好的尖锐的峰。显示的是它的离子形式和中性

化合物的转变，苯甲酸的Pka等于4.2,理论上由HH公示得知，当溶液PH值

等于2.2，99%的苯甲酸以中性化合物存在,PH值等于6.299%的苯甲酸

以离子形式存在，所以当缓冲液PH值等于2.2，中性化合物以竣酸形式保留

于反相柱，表1列出了一般缓冲液和他们的缓冲范围。从表1知磷酸盐和柠檬

酸盐缓冲液能用于PH值等于2.2。

当化合物只有氨基，缓冲体系的选择十分简单，大多数氨基化合物在PH

值小于9都被质子化，所以所有PH值在7或更低的溶液均适合应用，你也许

会问水的PH值大约是1.为什么还用缓冲盐，因为缓冲盐有助于增加方法的可

靠性，以及色谱峰的尖锐性，PH值的降低有助于氨基化合物保留的减弱，减小

化合物与硅胶表面硅羟基的作用，而使峰更尖锐，从表1可值，任何缓冲液均

可应用于氨