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大鼠肝缺血再灌注损伤模型评价方法综述

摘要：基于肝缺血再灌注损伤相关研究，综述了成功制作大鼠肝缺血再灌注损伤模型后大鼠肝脏微循环、病理形态学等方面的变化。探讨大鼠肝缺血再灌注损伤模型制作成功与否的评价方法，简要归纳分析了血清学评价、病理形态学观察等模型评价方法，提出了评价大鼠肝缺血再灌注损伤模型的适宜方法，为肝缺血再灌注损伤相关研究提供参考。

关键词：肝脏；缺血再灌注损伤；模型；评价

肝脏缺血再灌注损伤（hepaticischemiareperfusioninjury,HIRI）是指肝脏缺血一段时间，重新灌注血液后，肝组织功能和结构损伤反而加重的一种临床综合征，是引起肝切除、肝移植、休克后相关并发症的主要原因之一。由于肝缺血再灌注损伤发生机制复杂，至今尚未完全阐明[1]。目前研究集中在大鼠实验，因此制作一种稳定可靠的HIRI动物模型以研究其发生发展、预防及治疗具有重要意义[2]。实验模型的成功制作是实验研究的基础和关键，对动物模型制作的评价显得尤为重要。本文就大鼠HIRI模型制作的评价方法做一综述。

血清学评价

大鼠血清中丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）

肝细胞中的酶在肝细胞损伤时可释放入血，测定其血清活性或含量可反映肝细胞损伤程度。其中，ALT、AST为国外内学者采用最多的血清学指标[3-20]，分别存在于肝细胞质和线粒体中，肝细胞膜受损时ALT、AST释放入血，血清水平升高，以反映肝组织损伤。班跃松等[5]在进行HIRI造模时于大鼠肝缺血30min再灌注6h后，右颈总动脉抽血测定ALT活性。结果显示与假手术组相比，H/I组大鼠血清ALT活性显著升高，提示造模成功。尚有学者[6]经腹主动脉取血，测定血清ALT、AST活性并评价模型制作成功。同样以ALT、AST作为判断指标，也有学者经静脉取血[9、10]提示造模成功。

ALT、AST的活性间接反映肝脏病理状态，说明HIRI造模是否成功。值得注意的是，由于ALT、AST在细胞内分布位置和在血清中半衰期的不同，二者反映肝细胞损伤的灵敏度亦不同。在HiroyukiKanazawa等[15]的研究中ALT对同一处理因素的敏感度明显高于AST，可能因为ALT存在于细胞质中，AST存在于线粒体内，故在肝细胞中等程度损伤时ALT的漏出率远大于AST。此外，血浆中ALT的半衰期较AST为，故ALT的灵敏度相应高于AST。同时测定ALT、AST活性或者计算二者比值可及时全面反映肝细胞损伤。

碱性磷酸酶(ALP)、谷氨酰转肽酶(GGT)、总胆红素(TBIL)

ALP主要用于肝胆系统疾病的检查。GGT亦广泛分布于肝脏胆管系统，其血清活性增高提示有胆道梗阻性疾病。TBIL作为肝脏的代谢产物，可反映肝胆系统的胆色素代谢，亦可联合ALP协助诊断胆管梗阻性疾病。

张国欣等[11]在造模后腹主动脉采血，测定血清ALP、GGT及TBIL活性。结果显示HIRI组大鼠血清ALT、ALP、GGT和TBIL活性比假手术组显著升高。由此推断，HIRI大鼠肝实质和胆管系统同时受累。ALP、GGT及TBIL的意义在于：通过TBIL活性反映HIRI大鼠肝脏胆色素代谢状态，通过ALP、GGT活性佐证胆管系统受累情况，为探究HIRI胆管系统损伤提供依据。

大鼠血清中丙二醛（MDA）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）

HIRI时，过氧化作为重要机制参与组织损伤，再灌注时抗氧化机制保护肝细胞免受氧自由基的损伤，随着IR进展，抗氧化酶减少，氧自由基损伤细胞。故抗氧化酶GSH-Px和脂质过氧化终产物MDA可以从氧化应激角度反映HIRI肝组织损伤。刘孟杰等[7]造模后经右颈总动脉采血，测定MDA活性，HIRI组大鼠MDA活性显著升高，提示造模成功。MDA、GSH-Px能从氧化应激角度说明HIRI相关损伤，为HIRI研究的常用指标。

病理形态学观察及Suzuki评分

病理形态学观察

诸多学者研究表明[4,5,7,9,10,14-16，19，21]，在大鼠HIRI时，肝脏会出现不同程度的大体及镜下改变，其形态学变化直观可见，结合血清学指标可以更有力地判定HIRI大鼠造模成功与否。刘孟杰等[7]在各组大鼠HIRI后取肝组织染色并观察，结果显示HIRI组大鼠肝组织血窦扩张，肝细胞染色变浅，体积增大，可见空泡及气球样变，提示HIRI造模成功。

另外，我国学者在进行大鼠HIRI的相关研究中，因实验条件、造模方法不同，造模时缺血、再灌注时间不一致，考虑到动物实验的顺利实施及在麻醉状态下平稳存活，造模、再灌注时间，成为HIRI研究的关键问题。造模时间过长或缺血、再灌注时间比例不当，会导致大鼠损伤过重而死亡；造模时间过短，则损伤不明显、不典型。而病理形态学观察不受血清学指标半衰期的限制，可直观反映肝脏损伤，故可将其作为探讨肝