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紫外-可见吸收光谱法的应用

一、定性分析通常根据吸收光谱的形状、吸收峰的数目以及最大吸收波长的位置和相应的摩尔吸收系数进行定性鉴定。一般采用比较光谱法：即在相同的测定条件下，比较待测物与已知标准物的吸收光谱曲线，如果它们的吸收光谱曲线完全等同，则可认为是同一物质。

在进行定性鉴定时，需要注意：1.测试溶剂：应当对标准物和待测物有良好的溶解度，本身在测定的波长内无光的吸收，有良好的稳定性。2.测试的条件：标准物和待测物测试条件要完全相同，如溶剂、PH、离子强度、温度及所用仪器等。3.更改测试条件：为了防止测试数据的假象，要对现有某些条件进行适当的变换，改变其中的某些测定条件，然后看标准物和待测物的吸收光谱是否仍然完全相同。

二、结构分析判断所含官能团、有机化合物的同分异构体。（例如：某一化合物在250-300nm有强吸收带，则表示存在苯环的特征吸收；若在210-350nm有强吸收带，则可能含有两个双键的共轭单位。）三、纯度鉴定根据在吸收光谱最大吸收峰的位置和峰形状、数量判断该物质的纯度。四、定量分析根据朗伯—比尔定律，物质在一定波长处的吸光度与它的浓度呈线性关系。所以通过测定溶液对一定波长入射光的吸光度，便可求得溶液的浓度和含量。紫外可见分光光度法不仅用于测定微量成分，而且用于常量组分和多组分混合物的测定。

定性分析与定量分析的基础定性分析基础定量分析基础物质对光的选择吸收物质的电子结构不同，所能吸收光的波长也不同，这就构成了物质对光的选择吸收基础。ABA?在一定的实验条件下，物质对光的吸收与物质的浓度成正比。A?C增大吸收曲线

★同一种物质对不同波长光的吸光度不同。吸光度最大处对应的波长称为最大吸收波长λmax。★同一物质的浓度不同时，光吸收曲线形状相同，最大吸收波长不变，只是相应的吸收度大小不同。★物质不同，其分子结构不同，则吸收光谱曲线不同，最大吸收波长也不同。所以可以根据吸收光谱曲线对物质进行定性鉴定和定量分析。

物质对光的吸收特征，可以用吸收曲线来描述。以入射光的波长λ为横坐标，溶液的吸光度A为纵坐标作图，得到的曲线即为该物质的紫外-可见吸收曲线或吸收光谱。吸收曲线表明了物质对不同波长的入射光的吸收能力。

(一)单波长分光光度法1.单组分物质的定量分析（1）比较法：在相同的条件下配制样品溶液和标准溶液（与待测组分的浓度近似），在相同的实验条件和最大波长处分别测得吸光度Ax和As，然后进行比较，求得样品溶液中待测组分的浓度，Cx=Cs×(Ax/As)。（2）标准曲线法：首先配制一系列已知浓度的标准溶液，在最大吸收波长处分别测得标准溶液的吸光度，然后，做A-c的校正曲线（理想的曲线应为经过原点的直线）。在完全相同的条件下测出试液的吸光度，并从曲线上求得相应的试液的浓度。

ACCxAx标准曲线/工作曲线制作根据光的吸收定律:吸光度与吸光物质的含量成正比，这是光度法进行定量的基础，标准曲线就是根据这一原理制作的。

2.多组分物质的定量分析根据吸光度加和性原理，对于两种或两种以上吸光组分的混合物的定量分析，可不需要分离而直接测得。A?XY?1?2

根据加合性原则，解联立方程法A?XY?1?2k为物质的特征参数，可通过配制标准溶液测得。解联立方程，可求得Cx,CyACs(x)

（二）双波长分光光度法不需空白溶液作参比；但需要两个单色器获得两束单色光(λ1和λ2)；以参比波长λ1处的吸光度Aλ1作为参比，来消除干扰。对于多组分混合物、浑浊试样分析及存在背景干扰或共存组分吸收干扰的情况，利用双波长分光光度法灵敏度、选择性、测量精密度等方面都比单波长法有所提高。

ΔＡ＝Aλ2－Aλ1＝（kλ2－kλ1)bc两波长处测得的吸光度差值ΔＡ与待测组分浓度成正比。kλ1和kλ2分别表示待测组分在λ1和λ2处的摩尔吸光系数。

关键问题：选择波长组合λ1、λ2的基本要求：⑴选定的波长λ1和λ2处干扰组分应具有相同吸光度。测得的吸光度差ΔＡ只与待测组分的浓度呈线性关系，而与干扰组分无关。⑵在选定的两个波长λ1和λ2处待测组分的吸光度应具有足够大的差值。

三、示差分光光度法常规的分光光度法是采用空白溶液作参比，对于待测组分含量较高时，相对误差较大，这时需采用示差分光光度法。示差法是以浓度稍低于待测溶液浓度的标准溶液作参比，测定待测溶液的吸光度值。

设：待测溶液浓度为cx，标准溶液浓度为cs(cscx)。则：Ax=kbcxAs=kbcsΔＡ＝Ａx－Ａs=kb(cx－cs