新生牛血清检测要求及.pdfVIP

附录ⅩIIID

牛检测要求

本品系从出生14小时内未进食的牛采血分离，经除菌过滤后制成。牛

生产过程中任意添加其他物质成分。牛用于生产前应逐批进

行以下检查，并应符合规定。

蛋白质含量应为3.5%～5.0%（附录ⅥB第一法）。

血红蛋白用化高铁法或其他适宜的方法测定。应不高于0.02%。

大肠杆菌噬菌体采用噬斑法和增殖法检测。有噬菌体污染。

摩尔渗透压（指标待定）

无菌检查依法检查，应符合规定（附录ⅫA）。

支原体检查依法检查，应符合规定（附录ⅫB）。

细菌内毒素检查应不高于10EU/ml（附录ⅫE凝胶限量试验）。

检查

1.细胞培养法

（1）非血吸附检查

将牛供试品分别接种到人源（如人二倍体细胞）、猴源（如Vero细胞）

以及牛肾传代细胞三种细胞，采用的牛肾传代细胞系应证明无牛的污染。每种

细胞至少接种6瓶，每瓶细胞悬液接种量不少于培养液总量的25%。于36±1℃培养

21天。接种的每种细胞都应同时设立牛对照和阳性对照，（对照

用牛应证明无牛污染）。培养过程中可根据细胞生长情况更换细胞培养

液，每次更换培养液前应观察（肉眼/显微镜）有无细胞病变出现。培养到期

后，对照应无任何细胞病变出现，阳性对照应出现典型的细胞病变，试验成

立。供试品检查应不出现任何细胞病变为，符合要求。

（2）血吸附检查

将上述接种供试品的每种细胞取2瓶进行血吸附检查。用0.2%~0.5%鸡和

豚鼠红细胞混合悬液覆盖于细胞表面，置2~8℃分钟，然后置20~25℃30分钟，

分别进行镜检，观察红细胞吸附情况，供试品检查结果均应为。试验同时

应设立血吸附阳性对照。

2.免疫荧光抗体检查法

采用直接或间接免疫荧光抗体检查法，至少应对牛腹泻，牛腺、牛细小

、呼肠孤、狂犬病以及牛副流感进行检查，结果均应为。

支持细胞增殖检查用Sp2/0-Ag14或适宜的非贴壁传代细胞进行。

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（1）细胞生长曲线的测定取供试品按10%浓度配制细胞培养液，按每1ml含10

的细胞浓度接种细胞，每天计数活细胞，连续观察一周，并绘制生长曲线，细胞

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的最大增殖浓度应不低于每1ml含10。

（2）细胞倍增时间的测定按生长曲线计算细胞的倍增时间。取细胞峰值前一天

的细胞计数(Y)、接种细胞数(X)及生长时间(T)计算。

倍增时间=T/AA=logY/X

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Sp2/0-Ag14细胞的倍增时间应不超过20小时。

1.（3）克隆率的测定按有限稀释法将细胞稀释，并按每孔1个细胞的浓

度接种于96孔细胞培养板，每板至少接种48孔，于37℃、5%二氧化碳培

AppendixXIII

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