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DB35T8972009食品中碱性橙、碱性嫩黄O和碱性桃红T含量的测定

本标准规定了食品中碱性橙、碱性嫩黄O和碱性桃红T含量的高效液相色谱测定方法。本标准适用于调味品、水产品、豆制品等食品中碱性橙、碱性嫩黄O和碱性桃红T含量的测定。

本标准的方法检出限：碱性橙为0.01mg/kg，碱性嫩黄O为0.01mg/kg，碱性桃红T为0.02mg/kg。

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的必威体育精装版版本。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本适用于本标准。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T5009.1食品卫生检验方法理化部分总则

本标准中用到的术语和定义如下：

3.1碱性橙（BasicOrange）：又称盐基橙，是一种偶氮类碱性染料，化学名称为4[(2,4二硝基苯基)偶氮]N,N二甲基苯胺，分子式为C14H12N4O4，主要用于纺织、皮革和纸张染色。

3.2碱性嫩黄O（BasicYellow2）：又称盐基嫩黄O，化学名称为2[(4氨基苯基)偶氮]N,N二甲基苯胺，分子式为C14H15N3，是一种黄色碱性染料，主要用于丝绸、羊毛和尼龙的染色。

3.3碱性桃红T（BasicRed18）：又称盐基桃红T，化学名称为4[(2,4二硝基苯基)偶氮]N,N二甲基苯胺，分子式为C18H16N4O4，是一种红色碱性染料，主要用于纺织品的染色。

3.4检出限（LimitofDetection,LOD）：在给定的置信水平下，能够被检测出的待测物质的最低浓度或量。

3.5定量限（LimitofQuantitation,LOQ）：在给定的置信水平下，能够被准确定量的待测物质的最低浓度或量。

原理：试样中的碱性橙、碱性嫩黄O和碱性桃红T经甲醇水溶液提取，固相萃取柱净化，高效液相色谱分离，二极管阵列检测器检测，外标法定量。

4试剂和材料

除非另有说明，本标准所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

4.1甲醇：色谱纯。

4.2乙腈：色谱纯。

4.3乙酸铵：优级纯。

4.4甲酸：色谱纯。

4.5甲醇水溶液（1+1）：量取100mL甲醇和100mL水，混匀。

4.60.02mol/L乙酸铵溶液：称取1.54g乙酸铵，溶于1000mL水中，混匀。

4.70.1%甲酸溶液：量取1mL甲酸，溶于1000mL水中，混匀。

4.8标准品：

a)碱性橙标准品：纯度≥95%。

b)碱性嫩黄O标准品：纯度≥95%。

c)碱性桃红T标准品：纯度≥95%。

4.9标准储备液：分别准确称取碱性橙、碱性嫩黄O和碱性桃红T标准品各10.0mg，置于10mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，配制成1.0mg/mL的标准储备液，于18℃避光保存，有效期3个月。

4.10混合标准中间液：分别准确吸取碱性橙、碱性嫩黄O和碱性桃红T标准储备液各1.0mL，置于10mL棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成100μg/mL的混合标准中间液，于4℃避光保存，有效期1个月。

4.12固相萃取柱：HLB固相萃取柱（200mg，6mL）或相当者。

4.13微孔滤膜：0.22μm，有机相。

5仪器和设备

5.1高效液相色谱仪：配有二极管阵列检测器。

5.2分析天平：感量0.1mg和0.01g。

5.3离心机：转速≥4000r/min。

5.4旋涡混合器。

5.5超声波清洗器。

5.6氮吹仪。

5.7固相萃取装置。

5.8组织捣碎机。

5.9pH计：精度±0.02。

6分析步骤

6.1试样制备

6.1.1固体试样：取代表性样品约500g，用组织捣碎机捣碎混匀，装入洁净容器中，密封后于18℃保存备用。

6.1.2液体试样：取代表性样品约500mL，充分混匀后装入洁净容器中，于4℃保存备用。

6.2提取

6.2.1称取5.0g（精确至0.01g）试样于50mL离心管中，加入20mL甲醇水溶液（1+1），旋涡混合2min，超声提取20min，以4000r/min离心5min，将上清液转移至另一离心管中。

6.2.2残渣重复提取一次，合并上清液，用氮吹仪浓缩至近干，用5mL甲醇水溶液（1+1）溶解残渣，待净化。

6.3净化

6.3.1HLB固相萃取柱依次用5mL甲醇、5mL水活化，保持柱体湿润。

6.3.3依次用5mL水和5mL甲醇水溶液（1+1）淋洗，弃去淋洗液。

6.3.4用5mL甲醇洗脱，收集洗脱液于10mL离心管中。