2005级开题报告-邓岩.pptVIP

硕士研究生

开题报告;5’-氮杂脱氧胞苷联合放疗对鼻咽癌RASSF1A基因甲基化和表达的影响;硕士研究生开题报告;立题依据;硕士研究生开题报告;硕士研究生开题报告;硕士研究生开题报告;硕士研究生开题报告;硕士研究生开题报告;硕士研究生开题报告;硕士研究生开题报告;硕士研究生开题报告;硕士研究生开题报告;硕士研究生开题报告;硕士研究生开题报告;硕士研究生开题报告;硕士研究生开题报告;;硕士研究生开题报告;硕士研究生开题报告;;第二部分;实验目的;实验目的

;;鼻咽癌细胞系接种裸鼠;主要实验方法

（一）甲基化特异性PCR（MSP）

MSP法原理:单链DNA的胞嘧啶(C)可被亚硫酸氢盐脱氨基转变为尿嘧啶(U),而5甲基胞嘧啶(5mC)则不能被修饰,仍保持为5甲基胞嘧啶(5mC),根据5甲基胞嘧啶与胞嘧啶修饰后的不同,发生甲基化与未发生甲基化DNA的上游引物之间的差别为胞嘧啶(C)变为胸腺嘧啶(T),下游引物的差别为鸟嘌呤(G)变为腺嘌呤(A)。据此设计甲基化(p16m)等位基因特异引物和非甲基化(p16u)引物,用这两对引物对同一模板进行扩增来检测待扩增片段的甲基化状况。能用p16m引物扩增的,说明了该扩增片段已发生了甲基化,能用p16u引物扩增的,说明了该扩增片段没发生甲基化,如用两对引物都能扩出,则说明了该扩增片段存在部分程度的甲基化。本研究所扩增的片段位于启动子和第一外显子,其引物序列见表

-;硕士研究生开题报告;主要实验方法

（一）逆转录PCR

1、抽提鼻咽组织和鼻咽癌细胞株总RNA，42oC完成

2、引物Oligo（dT）15：正义引物5’-TCTGGGGCGTCGTGCGCAAA-3’;反义产物5’-GAACCTTGATGAAGCCTGTG-3’

3、?内对照：甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）

4、?扩增产物在10%聚丙烯酰胺凝胶电泳，溴化乙啶（小心，强烈致瘤剂）染色

5、??测定RASSF1A和GAPDH基因产物条带吸光度的相对比值。该比值表示RASSF1A基因的相对表达强度。

-;主要实验方法;第四部分;1.未用5’氮杂脱氧胞苷与放疗前测甲基化正常组织程度低，鼻咽癌组织甲基化程度高，能与转移能力正相关

;2.未用5’氮杂脱氧胞苷与放疗前测RASSF1A表达正常组织高，鼻咽癌组织低，表达能力与转移能力负相关

;;;第五部分;编号;时间安排;谢谢大家！