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中药学本科毕业论文复方莪术油抗菌作用的初步研究

目的：探讨复方莪术油的体外抗菌活性，为其临床合理应用提供实验依据。方法：采用纸片扩散法（K-B法）测定复方莪术油对常见临床致病菌的抑菌圈直径，初步判断其抗菌活性；采用微量肉汤稀释法测定其对敏感菌株的最低抑菌浓度（MIC），评价其抗菌效力。结果：复方莪术油对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌均有不同程度的抑制作用，其中对金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的抑制作用较强，抑菌圈直径较大，MIC值较低；对大肠杆菌和铜绿假单胞菌的抑制作用相对较弱。结论：复方莪术油具有一定的体外抗菌活性，尤其对革兰氏阳性球菌效果较好，为其在感染性疾病的治疗中提供了一定的实验支持。

关键词：复方莪术油；抗菌作用；最低抑菌浓度；纸片扩散法

Abstract

引言

感染性疾病一直是威胁人类健康的重要问题，随着抗生素的广泛应用甚至滥用，耐药菌株不断涌现，多重耐药菌感染的治疗已成为临床面临的严峻挑战。因此，从天然药物中寻找具有抗菌活性的有效成分或复方，开发新型抗菌药物，具有重要的理论意义和实用价值。

莪术为姜科植物蓬莪术、广西莪术或温郁金的干燥根茎，是常用的活血化瘀中药，其主要活性成分为莪术油。现代药理学研究表明，莪术油具有抗肿瘤、抗炎、抗病毒、抗菌等多种生物活性。莪术油中的莪术醇、莪术酮等成分被认为是其发挥药理作用的主要物质基础。已有研究显示，莪术油对多种细菌、真菌具有抑制作用。然而，中药的优势在于复方应用，通过多成分、多靶点的协同作用达到治疗效果。复方莪术油在莪术油的基础上，配伍其他具有抗菌或协同作用的中药成分，期望能增强其抗菌效果，扩大抗菌谱，或降低不良反应。

本研究旨在通过体外实验，观察复方莪术油对临床常见致病菌的抑制作用，测定其最低抑菌浓度，初步评价其抗菌活性，为该复方的进一步开发利用和临床合理应用提供科学依据。

材料与方法

1.实验材料

1.1受试药物

复方莪术油（自制，主要成分为莪术油，并辅以数味具有清热解毒功效的中药，经提取精制而成）。实验时用无菌生理盐水或适宜溶剂配制成所需浓度的药液，经0.22μm微孔滤膜过滤除菌，4℃保存备用。

1.2菌种

金黄色葡萄球菌（ATCC____）、表皮葡萄球菌（临床分离株）、大肠杆菌（ATCC____）、铜绿假单胞菌（ATCC____），均由某微生物实验室提供。

1.3培养基与试剂

Mueller-Hinton（MH）琼脂培养基、MH肉汤培养基、营养琼脂斜面培养基等，均为市售合格产品。无菌生理盐水、二甲基亚砜（DMSO，分析纯）等。

1.4主要仪器

超净工作台、恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、微量移液器、培养皿、96孔板、游标卡尺等。

2.实验方法

2.1菌液制备

将保存的各菌株分别接种于营养琼脂斜面培养基上，37℃恒温培养18-24小时进行活化。挑取单个菌落接种于MH肉汤培养基中，37℃、180r/min振荡培养至对数生长期（约6-8小时）。用无菌生理盐水将菌液浓度调整至0.5麦氏比浊标准（约1.5×10^8CFU/mL），然后用MH肉汤稀释100倍，使其浓度约为1.5×10^6CFU/mL，备用。

2.2纸片扩散法（K-B法）测定抑菌圈直径

取上述稀释后的菌液0.1mL，均匀涂布于MH琼脂平板表面，待菌液吸收干燥后，将浸有一定浓度复方莪术油药液的无菌滤纸片（直径6mm，每片含药量经预实验确定）贴于平板表面，同时设生理盐水或溶剂对照纸片，以及阳性对照药纸片（如青霉素、庆大霉素，根据菌株类型选择）。每个菌株平行3个平板。将平板置于37℃恒温培养箱中倒置培养18-24小时后，用游标卡尺测量抑菌圈直径（精确至0.1mm），取平均值。根据抑菌圈直径大小判断抑菌活性强弱：直径20mm为极敏感，15-20mm为高敏感，10-14mm为中度敏感，10mm为不敏感或耐药。

2.3微量肉汤稀释法测定最低抑菌浓度（MIC）

针对K-B法中显示有明显抑菌作用的菌株，采用微量肉汤稀释法测定其MIC。在96孔板中进行，每孔加入100μLMH肉汤培养基。第1孔加入100μL一定浓度的复方莪术油药液，混匀后吸取100μL至第2孔，依次倍比稀释至第11孔，第11孔吸取100μL弃去。第12孔为阴性对照（仅含MH肉汤）。然后向每孔（除阴性对照孔外）加入100μL上述制备好的菌液（最终菌浓度约为7.5×10^5CFU/mL）。同时设阳性对照药孔和溶剂对照孔。盖好盖板，置于37℃恒温培养箱中培养18-24小时。观察结果，以无细菌生长的最低药物浓度为MIC。实验重复3次。

3.统计学处理

实验数据以均数±标准差（x±s）表示，采用SPSS软件进行统计学分析，组间比较采用t检验，P0.05为差异具有统计学意义。

结果与分析

1.复方莪术油对各菌株的抑菌圈直径（