基因工程基本操作程序优品文档.pptVIP

基因工程基本操作程序;一、目的基因的获取;;编码区;编码区;外显子：真核细胞基因DNA中的编码序列，这些序列被转录成RNA并进而翻译为蛋白质。

内含子：真核细胞基因

DNA中的间插序列，这些序列被转录成RNA，但随即被剪除而不翻译。;2.目的基因的概念;3.目的基因的获取的方法;（1）从基因库中获取目的基因;;部分基因文库的建立方法;cDNA合成过程;②基因组文库和cDNA文库的主要区别;（2）应用PCR技术扩增目的基因;D、人工合成目的基因不用限制性内切酶

科学家在培育抗虫棉时，起初把苏云金芽孢杆菌的抗虫基因插入载体质粒中，然后导入棉花的受精卵中，结果抗虫基因在棉花体内没有表达。

真核细胞的编码区是间隔的，不连续的。

（1）检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了

(3)用化学方法直接人工合成目的基因

含有氨苄青霉素的完全培养基

基因中内含子(位于编码蛋白质序列的非编码DNA片段）

Hind限制性酶ⅠⅡ

DNA分子杂交（northern杂交）

科学家又在有启动子、抗虫基因的质粒中插入抗虫基因终止子，导入棉花受精卵，结果成长的植株，有了抗虫能力。

TACACGTGCATCAAT

外显子：真核细胞基因DNA中的编码序列，这些序列被转录成RNA并进而翻译为蛋白质。;怎样从基因文库中找到我们所需要的目的基因;以哺乳动物基因组DNA为例，介绍Southern印迹杂交的基本步骤;以哺乳动物基因组DNA为例，介绍Southern印迹杂交的基本步骤;以哺乳动物基因组DNA为例，介绍Southern印迹杂交的基本步骤;(3)用化学方法直接人工合成目的基因;1.作用：;质粒;寻根问底：;资料:;①②③⑤B.

鉴定——个体生物学水平的鉴定

①基因文库和部分基因文库的慨念：

（2）将目的基因导入动物细胞

基因中内含子(位于编码蛋白质序列的非编码DNA片段）

（1）DNA分子与DNA分子的之间杂交

（二）DNA限制酶消化

将生物的所有DNA直接导入受体细胞不是更简便吗？如果这么做，结果会怎样？

复性或退火（55～60OC)：

科学家在培育抗虫棉时，起初把苏云金芽孢杆菌的抗虫基因插入载体质粒中，然后导入棉花的受精卵中，结果抗虫基因在棉花体内没有表达。

四、放射性自显影检测

若通过基因过程生产人的糖蛋???可以用大肠杆菌作为工程菌吗？

（2）真核与原核生物基因结构的比较

将基因文库中的所有菌落裂解，用蛋白酶和RNA酶消化大部分蛋白质和RNA（如量不够可用PCR扩增）

个体生物学水平的鉴定：

真正能摄入重组DNA分子的受体细胞很少。

Hind限制性酶ⅠⅡ;①特点:;Hind限制性酶ⅠⅡ;花粉管通道法：;基因枪法：;;③常用法：;例：;若通过基因过程生产人的糖蛋白可以用大肠杆菌作为工程菌吗？;四目的基因的检测与鉴定——检查是否成功;1.检测;;变性;;例：用棉铃饲喂棉铃虫，如虫吃后不出现中毒症状，说明未摄入目的基因或摄入目的基因未表达。如虫吃后中毒死亡，则说明摄入了抗虫基因并得到表达。;不能，受体细胞必须表现出特定的性状，才能说明目的基因完成了表达。;细菌的检测，将每个受体细胞单独培养形成菌落，检测菌落中是否有目的基因的表达产物。淘汰无表达产物的菌落，保留有表达产物的进一步培养、研究。;1、有关基因工程的叙述中，错误的是()

A、DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来

B、限制性内切酶用于目的基因的获得

C、目的基因须由运载体导入受体细胞

D、人工合成目的基因不用限制性内切酶;2、下列属于获取目的基因的方法的是()

①利用mRNA反转录形成

②从基因组文库中提取

③从受体细胞中提取

④利用PCR技术

⑤利用DNA转录

⑥人工合成

A.①②③⑤B.①②⑤⑥

C.①②③④D.①②④⑥;3、有关基因工程的叙述正确的是（）

A、限制酶只在获得目的基因时才用

B、重组质粒的形成在细胞内完成

C、质粒都可作为运载体

D、蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料;4、基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的，在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是（）

A、人工合成目的基因

B、目的基因与运载体结合

C、将目的基因导入受体细胞

D、目的基因的检测和表达

1A2D3D4C;;脱分化;;存活的大肠杆菌;感谢观看