级硕士实验课补体依赖细胞毒试验讲课文档.pptVIP

级硕士实验课补体依赖细胞毒试验第一页，共9页。

实验原理细胞性抗原与特异性抗体(IgG1,2,3或IgM)的结合可激活补体活化的经典途径，引起细胞膜损伤，膜通透性改变而吸收染料，使细胞着色，胀大而死亡，失去正常的折光性。根据死细胞的多少判断细胞毒性的强弱。本次实验采用抗Thy-1血清(Thy-1是T细胞的一种表面标志)与小鼠的胸腺和脾的T细胞相互作用，通过激活补体对胸腺和脾的T细胞进行杀伤。第二页，共9页。

TCell细胞溶解现象补体T细胞+抗Thy-1抗体+MAC实验原理示意图第三页，共9页。

实验分组 四人一组，1只小鼠/组。两人做脾，两人做胸腺。第四页，共9页。

物品分配器材名称量/组试剂名称量/组加样器1把PBS10ml吸头12个抗Thy-1血清0.3ml载玻片/盖玻片4套台酚兰1瓶显微镜1台补体0.5ml小试管6支小鼠1只滴管2支平皿1对刻度吸管(5ml)1支剪刀、镊子(直,弯)1套纱布块2块第五页，共9页。

操作步骤将3mlPBS加入平皿中。小鼠脱颈处死，取脾和胸腺(分别位于左侧腹部和胸骨柄处)取胸腺和脾脏分别放到平皿中，用直头镊子固定组织，用弯头镊子轻压组织，将其捣碎，再将3-4层纱布覆盖到组织上，然后用滴管隔着纱布将细胞悬液吸出。按下图加样：混匀后放置37℃水浴，孵育40分钟。取出后每管加入50ul台酚兰染液，混匀后立即取出染色的细胞悬液20ul滴到玻片上，用盖玻片盖上，在显微镜下观察。观察结果：计数200个细胞中死细胞数(死细胞形态为肿胀变大，失去折光性，呈兰色)。结果判定：第六页，共9页。

加样方法试管阳性管(ml)阴性管(ml)靶细胞100100抗Thy-1血清100—PBS—100补体100100第七页，共9页。

阳性管阳性管阴性管Ag+Ab+CAg+C细胞毒百分率(%)=阳性管活细胞数阴性管活细胞数)×100%(1-结果判定第八页，共9页。

谢谢大家！ThankYou！