第八植物花药花粉培养讲课文档.pptVIP

第四节花药培养4、花药接种：在无菌条件下（超净工作台上），把花药从小穗或花蕾中取出，接入固体或液体培养基。接种方法因不同植物而异。如水稻，可用“剪颖抖药法”，即先将小穗在颖壳2/3处剪下（内含花药），然后用镊子夹取带花药的颖壳，剪口朝下在试管口或三角瓶口敲打，使花药抖落在培养基表面。又如玉米，可用“去颖夹药法”，即用手捏住小穗颖壳上部，持镊子将花药基部的颖壳夹去掉，挤出花药敲接入培养基表面。一般每管或每瓶接种花药30～50个。第27页，共45页。第四节花药培养5、脱分化培养：脱分化培养主要是为诱导花药（花粉）产生愈伤组织。诱导培养基视不同植物需要可采用不同基本培养基和激素配比。如水稻，一般用N6作基本培养基，附加2.4—D2～3mg/l+KT1～2mg/l+水解乳蛋白（LH）500mg/l+蔗糖（S）30g/l+琼脂（Ag）4g/l，pH=5.8。花药接入诱导培养基后，一般置于黑暗条件，25～28℃下培养以诱导愈伤组织。用不同基本培养基和激素配比。第28页，共45页。第四节花药培养6、再分化培养：再分化培养主要是使花药（花粉）愈伤组织分化产生根、芽，再生成完整植株。不同植物对再分化的培养基及激素配比的要求也有所不同。一般可用MS为基本培养基，对水稻分化而言，可附加KT2～3mg/l+NAA0.5～1mg/l+IAA0.5～1mg/l+水解乳蛋白（LH）500mg/l+蔗糖（S）25g/l+琼脂（Ag）mg/l，pH=5.8。再分化培养一般需在光照1500Lux以上，25℃左右下进行。对再分化要求苗分化率高，根芽协调，苗正常健壮，根生长良好。故有时需作生根壮苗培养。第29页，共45页。第四节花药培养7、花粉植株移栽：当花粉植株生长至一定标准，应及时进行“炼苗”并移至苗床或营养钵中，细心管理使其生长健壮，然后移至大田栽种、管理、观测和选育。第30页，共45页。第四节花药培养8、染色体加倍：花粉植株因来自单倍体细胞，故大多数为单倍体植株，一般占60～70%，需加倍成为纯合二倍体才能直接利用。一般有2条途径：一是利用单倍体自然加倍，即在培养过程中通过细胞本身发生的核内有丝分裂，使染色体加倍，进而分化出纯合二倍体植株，不同植物的自然加倍率也不同，如水稻可达30%以上。二是利用秋水仙碱进行处理，如在花药培养时加入50～250mg/l或对单倍体苗生长点用0.04～0.2%秋水仙碱浓液浸泡2～3天或对单倍体组织、器官（如幼穗）切块离体培养并用0.02%秋水仙碱溶液浸泡愈伤组织24小时再分化植株，其他还有采用秋水仙碱溶液注射法、浸根法等。第31页，共45页。第四节花药培养花粉单倍体植物的培养程序花粉单倍体植物的培养共分五个程序：即（1）材料准备；（2）诱导花粉脱分化形成愈伤组织或胚状体；（3）愈伤组织的植株分化或胚状体的正常生长；（4）完整植物体的形成；（5）再生植株的驯化和移植。各程序及其技术关键列入下图：花粉单倍体植物的培养程序及其技术关键。第32页，共45页。第1页，共45页。优选第八植物花药花粉培养第2页，共45页。第一节有关基本概念及含义1、植物花药与花粉（粒）花药是植物花的雄性器官，由两部分细胞组成：（1）体细胞——药壁和药隔组织的细胞，按染色体倍性，为二倍体细胞。（2）雄性性细胞，即小孢子，又称“花粉粒”——花粉粒的细胞，为单倍体细胞。2、花药培养（Autherculture）:指把植物花药在合成培养基上进行培养，诱导花粉（粒）再生植株的方法。属于一种器官（植物雄性器官）培养。第3页，共45页。第一节有关基本概念及含义3、花粉（粒）培养（Pollenculture）:指把花粉从花药中分离出来，以单个花粉粒作为外植体进行离体培养的技术。属于单细胞培养。4、白化苗指在花药（花粉）培养中，禾本科特别是水稻因受有关因素影响，出现缺绿白化的再生植株称之。第4页，共45页。第一节有关基本概念及含义5、单倍体育种指通过花药（花粉）培养诱导单倍体花粉植株，经加倍纯合，快迅、准确地选育出植物新品种的一种育种方法。将具有单套染色体的单倍体植物，经人工染色体加倍，使其成为纯合二倍体。从中选出具有优良性状的个体。直接繁育成新品种；或选出具有单一优良性状的个体，作为杂交育种的原始材料，称之为单倍体育种。第5页，共45页。第二节花药和小孢子的发育1．花药分化与花粉粒形成花药是储存花粉粒的器官，1个花药里可有成千上万个花粉粒。花药的分化程