2025年微生物限度检查方法验证方案.pdfVIP

先天下之忧而忧，后天下之乐而乐。——范仲淹

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微生物限度检查方法验证方案

1.目的：

为确认所采用的方法适合于该药品的微生物限度检查，包括细菌、霉菌

及酵母菌计数和控制菌检查，特制定本验证方案，通过比较试验菌的恢复生

长结果，来评价整个检验方法的准确性、有效性和重现性，以确认供试品在

该实验条件下无抑菌活性或其抑菌活性可忽略不计，所采用的方法适用于该

品种的微生物限度检查。

验证过程应严格按照本方案规定的内容进行，若因特殊原因确需变更

时，应填写验证方案修改申请并报验证领导小组批准

2.范围：

本验证方案适用于微生物限度检查方法的验证。

3.规范性引用文件：

根据《中国药典》2010年版二部附录ⅪJ微生物限度检查法的要求，由

于某些供试品具有抗菌活性，在建立微生物检查方法或产品的组分发生改变

或原检查法的检验条件发生改变时，可能影响检验结果的准确性，必须对供

试品的抑菌活性及测定方法的可靠性进行验证。

4.验证实施：

4.4.1试验前的准备:

4.4.1.1试验用具的准备：将试验需用的试管、刻度吸管、薄膜过滤器、滤

膜（孔径0.22um、直径50mm）、平皿、空三角瓶、称量纸等，用牛皮纸包扎

好后，放于湿热灭菌器中，在121℃，灭菌30min，在3天内使用。

4.4.1.2试验用培养基的制备：取适用性检查合格的营养琼脂培养基、玫瑰

红钠琼脂培养基、营养肉汤培养基、胆盐乳糖培养基（BL）、改良马丁琼脂培

养基、4-甲基伞形酮葡糖苷酸培养基（MUG）等脱水培养基，按照相应的配制

说明，用纯化水配制、分装后，在2小时内，放于湿热灭菌器中，在121℃，

灭菌15min，在3周内使用。

4.4.1.3试验用稀释剂/缓冲液、冲洗液的制备：取在有效期内的试剂，按照

相应的配制方法，配制pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液、0.9%无菌氯化钠溶

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古之立大事者，不惟有超世之才，亦必有坚忍不拔之志。——苏轼

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液、0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液等，用纯化水配制，

加热使溶，过滤，分装，在121℃，灭菌15min，在3周内使用。

4.4.2试验菌的制备和稀释：

4.4.2.1细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证用菌液：

4.4.2.1.1取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物少

许接种至10ml营养肉汤中，在30～35℃培养18～24小时；取白色念珠菌的新

鲜培养物接种至改良马丁培养基中，在23～28℃培养24～48小时；取黑曲霉

的新鲜培养物接种至改良马丁琼脂斜面培养基上，23～28℃培养5～7天。

4.4.2.1.2将上述大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌

的均匀培养物（菌悬液），用0.9%无菌氯化钠溶液对倍稀释制成每1ml含菌

50～100cfu的试验菌液。在黑曲霉的改良马丁琼脂斜面培养基中，加入3～5ml

含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱（菌悬