鸡体内Ghrelin免疫反应阳性细胞的定位分布与功能关联探究.docxVIP

鸡体内Ghrelin免疫反应阳性细胞的定位分布与功能关联探究

一、引言

1.1研究背景

1999年，日本科学家Kojima等从大鼠胃提取物中成功分离纯化出一种含28个氨基酸残基的活性肽，并将其命名为Ghrelin。其结构特征为第3位丝氨酸残基被辛酰化，作为生长激素促分泌素受体（GHS-R）的内源性配体，Ghrelin具有多种重要的生物学功能。在哺乳动物中，大量研究表明，Ghrelin不仅能够刺激垂体前叶释放生长激素，调节机体生长发育，还能增强食欲、增加体重、调节能量平衡，并且在心血管系统、消化系统、碳水化合物代谢等方面也发挥着关键作用。例如，Nakazato等给小鼠静脉和脑室内注射外源性Ghrelin，结果引起明显的剂量相关的采食量增加，体重也相应增加，而能量消耗减少；Murakami等用抗血清处理大鼠，发现能够显著降低日采食量和体重。

鸡作为禽类的重要代表，在农业生产和生物学研究中具有重要地位。禽类与哺乳动物在生理结构和功能上存在诸多差异，尽管已有研究涉及鸡Ghrelin，但关于鸡体内Ghrelin免疫反应阳性细胞的定位分布情况尚未完全明确。Kaiya等应用RT-PCR方法，发现Ghrelin除在鸡腺胃中有高水平表达外，大脑纹状体有中度表达，小脑、视神经叶、脑干等有低水平表达；但也有研究结果不尽一致，Ahmed等在下丘脑弓状核中没有观察到Ghrelin免疫阳性反应，而在内侧核、视交叉上核、视前内侧核、视前上核观察到Ghrelin免疫反应阳性细胞。这些不同的研究结果表明，鸡体内Ghrelin免疫反应阳性细胞的定位分布仍存在诸多疑问，亟待深入探究。

1.2研究目的与意义

本研究旨在通过免疫组织化学等技术，明确鸡体内Ghrelin免疫反应阳性细胞的具体定位分布，包括在胃肠道、脑以及其他相关组织中的分布特点。这不仅有助于深入揭示鸡Ghrelin的生理功能及其作用机制，为禽类生理学研究提供重要的理论依据，还能进一步完善对Ghrelin在不同物种间功能差异的认识。在实际应用方面，本研究成果可为家禽养殖实践提供参考，例如通过调控Ghrelin相关信号通路，优化鸡的生长性能和饲料利用率，提高家禽养殖的经济效益。

二、材料与方法

2.1实验动物的选择与分组

选用1日龄健康岭南黄鸡100只，购自本地正规孵化场，这些鸡在相同的环境条件下饲养，自由采食和饮水。将其随机分为实验组和对照组，每组各50只。实验组用于进行不同处理后的Ghrelin免疫反应阳性细胞定位研究，对照组则保持正常饲养条件，不进行特殊处理，作为实验的参照标准。分组的依据主要是为了对比不同处理因素对鸡体内Ghrelin免疫反应阳性细胞分布的影响，通过设置对照组，可以更准确地分析实验组数据，明确实验处理的作用效果，为深入研究Ghrelin在鸡体内的生理功能提供有力支持。

2.2实验材料准备

兔抗鸡Ghrelin多克隆抗体购自Abcam公司，该抗体经过严格的质量检测，特异性高，能够准确识别鸡体内的Ghrelin。染色试剂包括苏木精、伊红、DAB显色试剂盒等，均购自Sigma公司，这些试剂纯度高、稳定性好，能够保证染色效果的准确性和可靠性。实验耗材如载玻片、盖玻片、离心管、移液器吸头、包埋模具等，均为一次性无菌产品，购自Corning公司，以确保实验过程不受污染。此外，还准备了4%多聚甲醛固定液、二甲苯、梯度乙醇（50%、70%、80%、95%、100%）等常规试剂，用于组织固定、脱水和透明等处理。

2.3免疫组织化学实验步骤

2.3.1石蜡切片制备

将实验组和对照组的鸡分别在特定时间点（如1周龄、2周龄、3周龄等）进行颈椎脱臼处死，迅速取出胃肠道（包括腺胃、肌胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、直肠）、脑（包括大脑、小脑、下丘脑、脑干等）以及其他相关组织（如肝脏、胰腺、脾脏等），用预冷的0.9%生理盐水冲洗干净，去除表面的血液和杂质。将组织块放入4%多聚甲醛固定液中，在4℃条件下固定24小时，以确保组织形态和抗原结构的稳定。固定后的组织依次经过50%、70%、80%、95%、100%梯度乙醇进行脱水处理，每个梯度停留30分钟，以彻底去除组织中的水分。然后将组织放入二甲苯中进行透明处理，共透明两次，每次30分钟，使组织变得透明，便于石蜡的渗透。将透明后的组织放入融化的石蜡中进行浸蜡处理，先在石蜡与二甲苯比例为1:3的混合液中浸蜡2小时，再在1:1的混合液中浸蜡2小时，最后在纯石蜡中浸蜡3次，每次2-4小时。将浸蜡后的组织放入包埋模具中，倒入融化的石蜡，迅速调整组织的位置和方向，使其在石蜡中