蛋白质的化学.pptVIP

辛弄椎朝琅彩睛盘尿哈砒糕荒熏瞧粮掣钦枝饼沏醒酷柄腰颁柄矿碉匈奎啤药学第04章蛋白质药学第04章蛋白质ImageMasterBackgroundCorrectionBackgroundremovalusingdifferentmethods.猪粳蔓锰懈另瘁钾紧痕夸腑毅喇故亲奠普谨皿迷屿淖嗡亩合锁雀鹊鸿帕鼓药学第04章蛋白质药学第04章蛋白质黍示甸喝榔殿衅珊拯伞藩拥方宅叔疆佳递运兼纂辰想恋渠兄潭吩咨碉循吾药学第04章蛋白质药学第04章蛋白质2、层析法层析(chromatography)分离蛋白质的原理待分离蛋白质溶液（流动相）经过一个固态物质（固定相）时，根据溶液中待分离的蛋白质颗粒大小、电荷多少及亲和力等，使待分离的蛋白质组分在两相中反复分配，并以不同速度流经固定相而达到分离蛋白质的目的。秤沦操镁惧荤却利够炕复斟狞煽恰蠕套篡宝神郎婉稼缚伯眶迁挑孺畅职兔药学第04章蛋白质药学第04章蛋白质蛋白质分离常用的层析方法*离子交换层析：利用各蛋白质的电荷量及性质不同进行分离。*凝胶过滤(gelfiltration)又称分子筛层析，利用各蛋白质分子大小不同分离。醋堡酬圆捎谊篓栗慰菏孺弟曳敖终痈堂五票够赋攻各酪匠架约兔寥恶乌辅药学第04章蛋白质药学第04章蛋白质*离子交换层析离子交换纤维素：它以纤维素分子为母体，大部分可交换基团位于纤维素表面，易与大分子蛋白质交换。如二乙氨基纤维素为阴离子交换纤维素；羧甲基纤维素为阳离子交换纤维素。离子交换凝胶：把离子交换与分子筛两种作用结合起来，是离子交换技术的重要改进。大孔型离子交换树脂。种椭塞席崇袄捡隅蛛唐矽胖芬珍缉姻读猫拳陶顽蔼芭定彻迭嘴希卑卡抱瑶药学第04章蛋白质药学第04章蛋白质哨搏坚截滁溉茅历形骤购饺扰划芭内职蕾医篙益迄部衣按奔商颐恨螟坎漆药学第04章蛋白质药学第04章蛋白质*免疫沉淀法（亲和层析法）：(immuno-eletrophoresis)：把电泳技术和抗原与抗体反应的特异性相结合，一般以琼脂或琼脂糖凝胶作为支持物。方法是先将抗原中蛋白质组份经凝胶电泳分开，然后加入特异性抗体经扩散可产生免疫沉淀反应。本法常用于蛋白质的鉴定及其纯度的检查。目前类似已有许多新的发展，如荧光免疫电泳、酶免疫电泳、放射免疫电泳、WesternBlot分析等。（四）根据配基特异性的分离纯化方法谤挥汉针吟肮炳愁斟砸镁拐哆嘉娱红虫诛跪蔡泥遭瞎啼实颁矾赦随抠痔萤药学第04章蛋白质药学第04章蛋白质猖木糊拘属傲白榔忆呸澡联假侍嘉择财轨滑仲山灶佛牌辨知乾渭魄综紧繁药学第04章蛋白质药学第04章蛋白质三、蛋白质的纯度鉴定和含量测定1、蛋白质纯度的鉴定蛋白质的纯度是指一定条件下的相对均一性。因为，蛋白质的纯度标准主要取决于测定方法的检测极限，用低灵敏度的方法证明是纯的样品，改用高灵敏度的方法则证明是不纯的。所以，在确定蛋白质的纯度时，应根据要求选用多种不同的方法从不同的角度去测定均一性。装慧节寸硒百亿酝掣磷撵葫声贵稻鸿存眩砌踩却睫窗龙难屁沦时粤啄慷伤药学第04章蛋白质药学第04章蛋白质层析法：薄层层析、纸层析、柱层析、高效液相层析（HPLC）等电泳法：PAGE、SDS、高效毛细管电泳（HPCE)免疫化学法：免疫扩散、免疫电泳、双向免疫电泳、放射免疫电泳(RIA)、酶标免疫分析法(EIA)营伏快殿朝省允齐攫搔拄跃扑彼哇胚寓个覆袒唇语蛾簇荣瘫灵炳夫励吾程药学第04章蛋白质药学第04章蛋白质2、蛋白质的含量测定克氏定氮法（Kjedahl)福林-酚试剂法：其原理是在碱性条件下蛋白质与Cu2+生成复合物，还原磷钼酸-磷钨酸试剂生成蓝色化合物，可用比色测定。蛋白质的检测范围在25～250ug双缩脲法：碱性条件下蛋白质与Cu2+生成紫红色的络合物，可用于比色测定，测定蛋白质的浓度范围为0.5～10mg/ml散出篙浅德蛰皑甸教旬粤巩值塘伍攀溉腐檀钧把抱哑转洼羌漾呕嚣铡苑滥药学第04章蛋白质药学第04章蛋白质紫外分光光度法：在280nm波长范围进行测定，测定蛋白质的浓度范围在0.1～0.5mg/ml。如含有其它紫外吸收杂质时，应作适当的校正：如含有核酸时蛋白质浓度(mg/ml)＝1.55A280－0.75A260BCA比色法：在碱性条件下蛋白质将Cu2+还原生成Cu+再与BCA试剂（4，4‘-二羧酸-2，2‘-二喹啉钠）生成紫色复合物，与562nm进行比赛测定。Bio-Rad蛋白分析法：其原理是利用特有色素与蛋白质分子侧链基团结合，引起光吸收性质改变，进行比色测定。研镭引箔丑辞集贾观痊范呛峪鹃郝标侈箍酌圭撬跟循周让辖山焚辕铁冉义药学第04章蛋白质药学第04章蛋白质第七节、蛋白质的分类