实验二 玻片标本制作.pptVIP

实验二玻片标本的制作一、实验前的准备工作1、器材：电磁炉、水浴锅、解剖刀、解剖针、解剖剪刀、镊子等。2、器皿的准备：解剖盘、培养皿、吸管、吸水纸、载玻片、盖玻片、酒精灯、标签纸等。3、试剂的准备：固定液、脱水剂、透明剂、染色剂、封片剂等等。常用固定剂的种类及配方1）固定剂的种类：在生物显微制片中所使用的固定剂可分为两大类，一类是单一固定剂（又称简单固定剂），它是由一种化学物质构成的，如酒精、甲醛（福尔马林）、冰醋酸、升汞和苦味酸都可以作为单一固定剂来使用。*取材取材就是指从动物或植物体上以及其他载体上获取研究和实验材料的过程叫取材。在制片中，取材是很重要的步骤，所取的动、植物材料必须新鲜而又要有代表性。已腐败的材料制成的玻片，不能反映材料的真实情况。取材的方法动物的取材：根据需要用锋利的刀片从动物的相应部位切取一块组织，如表面有污物需用生理盐水稍加清洗，放入固定液中。玻片标本的制作取材对象微小昆虫（蚜虫、蓟马、螨类）以及昆虫的某些构造（口器、触角、外生殖器等）玻片标本的类型永久玻片；临时玻片；染色昆虫标本制作玻片标本永久玻片标本制作步骤杀死、固定净化、软化洗涤脱水透明封片贴标签昆虫标本制作永久玻片标本制作2）、常用固定液的配方及其配制方法单一固定液A、酒精(C2H5OH):它是一种穿透速度快，易引起组织收缩的固定剂。作为固定液使用时，其浓度是70％的水溶液，一般不宜用高浓度的酒精固定生物样品。B、甲醛（HCHO）：甲醛是一种无色气体，它以37～40％的量溶于水后就称为福尔马林。甲醛是强还原剂，它不能与氧化剂混合使用，而且它又极容易被氧化成甲酸。常用的甲醛固定液是用福尔马林配制的，一般使用浓度为含纯甲醛4～5％的水溶液。这种固定液穿透能力虽不如酒精强，它也会使组织硬化，但组织的收缩小。用福尔马林固定的样品有利于细胞核的染色，特别是动物材料效果更佳。脱水用脱水剂逐渐取代掉组织细胞内所有水分的过程叫脱水。1、脱水的目的及其脱水剂的种类（1）、脱水的目的：经过脱水剂的作用，将组织内的所有水分彻底去除干净，并使组织细胞变成适当的硬度，以便于以后对样品的处理。（2）、脱水剂的种类：脱水剂必须能与水以任何的比例混合，常用的有两类。2、脱水的方法及注意事项1）、脱水的方法：用脱水剂逐渐取代组织中水分的过程叫脱水。常用的脱水剂有酒精和丙酮。最常用的是酒精。如果含水的样品直接进入高度酒精中，会造成组织收缩、变形、变硬和变脆，所以在脱水时一般采用逐渐脱水的方法。对大多数动、植物材料而言，可设如下浓度差进行脱水，50％、70％、80％、90％、100％（两次）。在每一级中脱水的时间，视样品质地不同有较大差异，动物组织每一级脱水10～20分钟；相同大小的植物组织脱水时间应增加1～2倍方可。对一些含水量大，柔嫩的样品（如动物的胚胎）和要求精细的制片，脱水剂的浓度级差可适当增加，如从10％、20％、30％、40％、50％……2）、脱水时的注意事项（1）、脱水应在带盖的容器（如青霉素效瓶）中进行，要防止空气中的水分进入脱水剂。（2）、在更换脱水剂时，应防止样品在移动过程中受挤压和任何损伤。（3）、脱水到高浓度脱水剂，在更换液体时，应防止样品的自然干燥，因为脱水剂易挥发，会造成样品自然干燥。（4）、脱水一定要彻底，否则样品不易透明，最终造成透蜡不完全，切片失败。透明1、透明的目的在制作过程中，透明是一个非常关键而重要的步骤，整个制片过程中需进行两次透明。一次是在样品经过脱水之后，必须对样品进行透明（置换）处理，这样才能保证包埋剂石蜡浸透到组织细胞的各个部位；第二次透明是在切片经过染色、脱水之后，也要对染色后的切片进行透明（可增强染色后切片的透明度和不同结构对照明光线的折射能力），才能进行封片。*