2025《实时荧光定量PCR检测方法的实际应用分析案例》3800字.docxVIP

下载本文档

1
0
约7.15千字
约 8页
2025-10-21 发布于湖北
举报
版权申诉

2025《实时荧光定量PCR检测方法的实际应用分析案例》3800字.docx

1、有哪些信誉好的足球投注网站（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击这里二次下载。
3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次，网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档

实时荧光定量PCR检测方法的实际应用分析案例

TOC\o1-3\h\u4079实时荧光定量PCR检测方法的实际应用分析案例 1

23351.1材料和仪器 1

48541.1.1材料 1

223151.1.2主要试剂 2

244661.1.3仪器设备 2

63321.2试验方法 2

168471.2.1增菌方法对比 2

96801.2.2增菌试验 3

13631.2.3样品验证 3

22151.3试验结果 4

30131.3.1增菌方法的选择 4

171661.3.2增菌试验结果 5

254621.3.3果汁样品验证结果 6

222451.4总结 8

由于实际浓缩苹果汁样品中脂环酸芽孢杆菌含量较低，无法达到所建立检测方法的检测限。为了使建立的方法能够应用到实际工厂检测中，尝试多种富集增菌方法尽量缩短不同浓度、不同菌种达到检测限的富集时间。另外，对果汁样品进行检测，完善样品检测流程，为果汁加工企业检测脂环酸芽孢杆菌提供可靠的技术方法，最终得到快速、简便、高效的检测方法。

1.1材料和仪器

1.1.1材料

脂环酸芽孢杆菌属A.acidoterrestris（DSM3923）、A.acidiphilus（DSM14558）、A.cycloheptanicus（DSM4006）、A.herbarius（DSM13609）购自德国生物材料资源中心（DSM），所有菌株均保存在-80℃冰箱中。浓缩苹果汁来自于国投中鲁股份有限公司乳山研发中心。菌株培养条件见表4-1。

AAM固体培养基：制备A溶液和B溶液，灭菌（121℃×20min）。

A：酵母浸粉2.0g，硫酸铵0.4g，硫酸镁1.0g，磷酸二氢钾1.2g，氯化钙0.38g，500mL蒸馏水，用1mol/LH2SO4或1mol/LNaOH调pH至1.0。

B：琼脂20.0g，葡萄糖2.0g，溶于500mL蒸馏水中加热溶解。为防止琼脂在酸性条件下水解，待A溶液和B溶液灭菌后冷却至50℃，将A溶液和B溶液混合，尽量避免产生气泡。

AAM液体培养基：酵母浸粉2.0g，葡萄糖2.0g，硫酸铵0.4g，硫酸镁1.0g，磷酸二氢钾1.2g，氯化钙0.38g，蒸馏水1L，用1mol/LH2SO4或1mol/LNaOH调pH至1.0。（121℃×20min）杀菌。

表4-1菌株培养条件

Table4-1Straincultureconditions

编号

种属

培养基

温度

DSM3923

A.acidoterrestris

AAM

45℃

DSM14558

A.acidiphilus

AAM

45℃

DSM4006

A.cycloheptanicus

AAM

45℃

DSM13609

A.herbarius

AAM

55℃

1.1.2主要试剂

试验所用主要试剂如表4-2所示。

表4-2主要试剂

Table4-2Mainreagents

试剂名称

生产厂家

纯度

琼脂

四川西陇化工有限公司

乙醇

四川西陇化工有限公司

丙三醇

四川西陇化工有限公司

氯化钠

四川西陇化工有限公司

葡萄糖

四川西陇化工有限公司

硫酸铵

四川西陇化工有限公司

硫酸镁

四川西陇化工有限公司

氯化钙

四川西陇化工有限公司

磷酸二氢钾

四川西陇化工有限公司

可溶性淀粉

四川西陇化工有限公司

酵母浸粉

北京奥博星生物技术有限责任公司

2×UltraSYBRMixture

天根生化科技（北京）有限公司

1.1.3仪器设备

试验所用主要试剂同表2-2。

1.2试验方法

1.2.1增菌方法对比

根据前期灵敏度试验结果得知A.acidoterrestris（DSM3923）的检出限为2.6×102CFU/mL；A.acidiphilus（DSM14558）的检出限为7.4×101CFU/mL；A.cycloheptanicus（DSM4006）的检出限为2.8×102CFU/mL；A.herbarius（DSM13609）的检出限为3.1×102CFU/mL。由于实际苹果浓缩汁样品中脂环酸芽孢杆菌含量一般较低，初期不能检出。为进一步提高检测效率，现采用两种方法进行快速增菌试验，使细菌快速生长至可检测的浓度，并确定四株菌在不同培养浓度下达到检出限的培养时间。

选取A.acidoterrestris（DSM3923）作为试验菌株进行两种增菌方法的对比。取保藏在-80℃超低温冰箱中的DSM3923，将保存菌株接种