微专题15 RTPCR、反向PCR与PCR定点诱变技术-2025高考生物人教版复习讲义（学生版）.pdfVIP

微专题15RT－PCR、反向PCR与PCR定点诱变技术

考情速览

热点考情

RTRCR2022·382022·242020·

－、实时荧光定量、全国乙卷，；江苏卷，；江

PCRPCR332020·25

与反向苏卷，；山东卷，

PCR2023·252021·16

定点诱变技术辽宁卷，；天津卷，

1RTPCRPCR

热点－与反向

(2024·25)TiVir(TDNA

黑吉辽卷，将天然质粒改造成含有基因的辅助质粒辅助－

)VirTDNA

转移和不含有基因、含有－的穿梭质粒，共同转入农杆菌，可提高转

化效率。细菌和棉花对密码子偏好不同，为提高翻译效率，增强棉花抗病虫害能

力，进行如下操作。回答下列问题。

F1F3R1R3TDNALBTDNARB

注：～，～表示引物；－－表示左边界；－－表示

OriKanRHygBRB

右边界；表示复制原点；表示卡那霉素抗性基因；表示潮霉素

抗性基因。

(1)从苏云金杆菌提取DNA时，需加入蛋白酶，其作用是

___________________________________________________________________

___________________________________________________________________

。

提取过程中加入体积分数为95%的预冷酒精，其目的是

___________________________________________________________________

___________________________________________________________________。

(2)本操作中获取目的基因的方法是________和________。

(3)穿梭质粒中p35s为启动子，其作用是________________________，驱动目的

基因转录；插入两个p35s启动子，其目的可能是____________________________

___________________________________________________________________。

RR

(4)根据图中穿梭质粒上的Kan和HygB两个标记基因的位置，用________基因

对应的抗生素初步筛选转化的棉花愈伤组织。

(5)为检测棉花植株是否导入目的基因，提取棉花植株染色体DNA作模板，进行