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病理科病理标本切片技术培训教程

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目录

01

基本概念介绍

02

设备与材料准备

03

操作步骤详解

04

质量控制与问题解决

05

安全注意事项

06

培训评估与资源

01

基本概念介绍

病理标本切片定义与原理

切片制备技术原理

将石蜡包埋的组织块置于切片机上，通过精密机械控制刀片切割成4-6微米的薄片，利用水的表面张力使切片展平，最终贴附于载玻片上。关键技术包括刀片角度调节和切片厚度均匀性控制。

染色与显像原理

H-E染色中，苏木精（Hematoxylin）与细胞核酸性成分结合显蓝色，伊红（Eosin）与细胞质碱性成分结合显粉红色，通过颜色对比区分组织结构，为病理诊断提供形态学依据。

组织固定与处理原理

病理标本需通过甲醛等固定液保存细胞结构，防止自溶和腐败，随后经脱水、透明、浸蜡等步骤使组织硬化，便于后续切片。此过程需严格控制时间与试剂浓度，以保持组织形态完整性。

03

02

01

疾病诊断金标准

切片技术为医学研究提供细胞水平的数据支持，如新药疗效评估或疾病机制探索；在教学中用于直观展示病变组织与正常组织的差异，培养医学生形态学辨识能力。

科研与教学价值

法医学与尸检应用

在死亡原因不明或纠纷案件中，病理切片可揭示心肌梗死、中毒等微观改变，为司法鉴定提供客观证据。

病理切片是肿瘤良恶性鉴别、炎症分级、免疫性疾病确诊的核心手段，尤其在癌症分期和分子病理检测中不可替代。例如，乳腺癌HER2检测需通过切片进行免疫组化分析。

技术应用范围与重要性

包括石蜡切片（常规诊断用）、冰冻切片（术中快速病理）、半薄切片（电镜样本前处理）和细胞涂片（体液或细针穿刺样本），每种技术适用于不同临床场景与时间要求。

切片类型分类标准

按制备方法分类

除H-E常规染色外，特殊染色如PAS（显示糖原）、Masson（胶原纤维）可针对性突出特定成分；免疫组化染色则通过抗原抗体反应定位蛋白质表达。

按染色方式分类

诊断性切片（明确病变性质）、研究性切片（实验数据采集）、教学切片（典型病例存档），需根据目的调整切片厚度和染色方案。

按用途分类

02

设备与材料准备

切片机种类及操作要点

旋转式切片机

超薄切片机

冷冻切片机

适用于常规石蜡包埋组织切片，需定期校准刀架角度与切片厚度，确保切片平整度与连续性。操作时需注意防震措施，避免因振动导致切片厚度不均或组织撕裂。

用于快速病理诊断，需预冷至适宜温度并保持恒温状态。操作要点包括组织速冻时间控制、防冰晶形成技术及刀片低温防粘处理。

专用于电镜样本制备，需配备钻石刀或玻璃刀，操作时需精确调节进样速度与切割角度，以获得纳米级厚度的超薄切片。

组织镊与毛笔

载玻片需经防脱片处理（如多聚赖氨酸涂层），厚度标准为1.0-1.2mm；盖玻片优选高透光率无气泡产品，尺寸需匹配观察区域。

载玻片与盖玻片

刀片与刀架

一次性刀片需保证刃口无缺口，刀架需具备稳固锁紧功能；可更换刀片的系统应定期检测刀座磨损情况。

应选用无静电、防粘连材质，尖端需精细抛光以避免划伤切片。镊子长度需适配操作者手型，毛笔毛质应柔软且不掉毛。

配套工具选择标准

标本处理材料清单

固定液

中性缓冲福尔马林为常规选择，需标注浓度（通常为10%）及pH值（7.2-7.4）。特殊组织（如脂肪）需添加钙离子稳定剂。

脱水试剂梯度

乙醇系列（70%-100%）需严格分装标识，二甲苯替代品应选择低毒性环保型，如柠檬烯或矿物油基溶液。

包埋介质

石蜡熔点范围需根据实验室环境温度选择（通常56-58℃），添加蜂蜡可提升韧性。快速包埋胶适用于冷冻切片前处理。

染色试剂

苏木素-伊红（HE）套装需含分化液与返蓝液，特殊染色试剂如PAS、Masson三色染剂需避光冷藏保存。

03

操作步骤详解

标本固定与包埋技术

标本固定液选择与处理

石蜡包埋操作规范

脱水与透明化流程

根据组织类型选择中性缓冲福尔马林或其他专用固定液，确保固定液与组织体积比为10:1，固定时间需充分渗透至组织中心，避免自溶或过度收缩。

采用梯度乙醇（从低浓度至高浓度）逐级脱水，随后使用二甲苯透明化处理，确保组织内水分被完全置换，为后续浸蜡创造条件。

将脱水透明后的组织置于熔融石蜡中浸渍，使用包埋模具精准定位组织方向，冷却后形成均匀包埋块，便于切片时保持结构完整性。

切片厚度控制方法

01

定期检查切片机刀片角度和夹持力度，确保刀片锋利无缺口，调整切片厚度参数（通常为3-5微米），避免因机械误差导致切片厚薄不均。

将包埋块置于冰台上预冷以增强硬度，切片时保持匀速推进，避免停顿或回拉，防止切片出现褶皱或断裂。

使用温水浴（40-45℃）使切片自然展平，再用载玻片贴附，避免气泡残留，晾干后标记编号以备染色。

02

03

切片机调试与校准

组织块预冷与切片技巧

切片展平与贴附