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2025年临床基因扩增检验技术人员上岗证考试题含答案

一、单项选择题（每题2分，共40分）

1.以下关于聚合酶链式反应（PCR）基本原理的描述，错误的是：

A.通过温度循环实现DNA双链的变性、引物退火和延伸

B.延伸阶段温度通常为72℃，依赖DNA聚合酶催化dNTP连接

C.每轮循环后目标DNA片段数量呈指数增长

D.扩增产物长度由模板DNA的长度决定

答案：D（扩增产物长度由引物在模板上的结合位置决定）

2.荧光定量PCR中，CT值（循环阈值）的定义是：

A.荧光信号达到仪器本底噪声时的循环数

B.荧光信号进入指数增长期起始点对应的循环数

C.荧光信号强度达到设定阈值时的循环数

D.荧光信号进入平台期时的循环数

答案：C

3.PCR实验室分区中，“产物分析区”的核心功能是：

A.样本接收与前处理

B.PCR反应体系配制

C.扩增产物的检测与分析

D.模板DNA提取

答案：C

4.进行新冠病毒核酸检测时，若阴性对照出现扩增曲线，最可能的原因是：

A.样本采集量不足

B.引物与模板非特异性结合

C.扩增产物污染

D.Taq酶活性降低

答案：C

5.关于引物设计的基本原则，错误的是：

A.引物长度建议18-25个核苷酸

B.引物GC含量应控制在40%-60%

C.引物3’端避免连续3个G/C碱基

D.引物5’端需与模板严格互补

答案：D（5’端可添加酶切位点等修饰，无需严格互补）

6.实时荧光PCR仪的校准周期通常不超过：

A.3个月

B.6个月

C.12个月

D.24个月

答案：B

7.核酸提取过程中，使用异硫氰酸胍的主要作用是：

A.裂解细胞并灭活核酸酶

B.沉淀DNA

C.结合RNA至固相载体

D.去除蛋白质杂质

答案：A

8.以下哪种物质不会抑制PCR反应？

A.血红蛋白

B.肝素

C.EDTA

D.dNTP

答案：D（dNTP是PCR反应原料）

9.基因扩增实验室空气流向应严格遵循：

A.产物分析区→扩增区→扩增前区

B.扩增前区→扩增区→产物分析区

C.扩增区→产物分析区→扩增前区

D.产物分析区→扩增前区→扩增区

答案：B（防止污染扩散，压力递减）

10.检测结果“阴性”的报告条件不包括：

A.阴性对照无扩增

B.阳性对照Ct值在控

C.内标Ct值超出实验室设定范围

D.样本扩增曲线未达到阈值

答案：C（内标需有效扩增，否则样本可能存在抑制）

11.关于实验室生物安全，错误的操作是：

A.离心管需盖紧后再放入离心机

B.处理血液样本时佩戴双层手套

C.移液器吸头直接丢弃至普通垃圾桶

D.台面污染后用10%次氯酸钠擦拭

答案：C（应丢弃至医疗废物专用容器）

12.以下属于荧光定量PCR探针法优点的是：

A.无需设计引物

B.特异性高于染料法

C.可同时检测多个靶标

D.成本低于染料法

答案：B

13.核酸提取质量的评估指标不包括：

A.OD260/OD280比值

B.浓度（ng/μL）

C.电泳条带完整性

D.样本采集时间

答案：D

14.PCR反应体系中，Mg2+浓度过高可能导致：

A.引物二聚体减少

B.非特异性扩增增加

C.扩增效率降低

D.产物量减少

答案：B（Mg2+影响Taq酶活性和引物结合特异性）

15.进行支原体检测时，若阳性样本Ct值显著高于预期，可能的原因是：

A.样本中支原体载量低

B.引物浓度过高

C.扩增程序退火温度过低

D.探针标记荧光基团脱落

答案：A

16.实验室记录应保存至少：

A.1年

B.2年

C.5年

D.10年

答案：C（依据《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法》）

17.以下哪种方法可有效去除PCR产物污染？

A.紫外线照射（254nm）30分钟

B.75%乙醇擦拭台面

C.使用去离子水清洗移液器

D.高温高压灭菌（121℃，20分钟）

答案：A（紫外线可破坏DNA双链）

18.多重PCR的关键技术是：

A.提高Taq酶浓度

B.优化引物对之间的兼容性

C.延长延伸时间

D.增加模板量

答案：B（避免引物间相互作用）

19.检测结果“灰区”的处理原则是：

A.