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3、分批灭菌的操作分批灭菌是在所用的发酵罐或其他培养装置中进行的,它是在配制罐中配好培养基后,通过专用管道输入发酵罐等培养设备中,然后开始灭菌。在进行培养基的间歇灭菌之前,通常先将发酵罐等培养装置的分空气过滤器进行灭菌,并且用空气将分过滤器吹干。开始灭菌时,应先放去夹套或蛇管中的冷水,开启排气管阀,通过空气管向发酵罐内的培养基通入蒸汽进行加热,同时,也可在夹套内通蒸汽进行间接加热。当培养基温度升到70℃左右时,从取样管和放料管向罐内通入蒸汽进一步加热,当温度升至120℃,罐压为1*105Pa(表压)时,打开接种、补料、消泡剂、酸、碱等管道阀门进行排气,当然在保温过程中,应注意凡在培养基液面下的各种进口管道都应通入蒸汽,而在液面以上的其余各管道则应排放蒸汽,这样才能不留死角,从而保证灭菌彻底。第29页,共45页,星期日,2025年,2月5日3、分批灭菌的操作保温结束后,依次关闭各排汽、进汽阀门,待罐内压力低于空气压力后,向罐内通入无菌空气,在夹套或蛇管中通冷水降温,使培养基的温度降到所需的温度,进行下一步的发酵和培养。间歇培养特点:由于培养基的间歇灭菌不需要专门的灭菌设备,投资少,对设备要求简单,对蒸汽的要求也比较低,且灭菌效果可靠,因此,间歇灭菌是中小型生产工厂经常采用的一种培养基灭菌方法。第30页,共45页,星期日,2025年,2月5日4保证间歇灭菌成功的要素内部结构合理(主要是无死角),焊缝及轴封装置可靠,蛇管无穿孔现象压力稳定的蒸汽合理的操作方法。发酵罐的接管图第31页,共45页,星期日,2025年,2月5日4、分批灭菌的注意事项1)各路蒸汽进口要畅通,防止短路逆流;罐内液体翻动要剧烈,以使罐内物料达到均一的灭菌温度。2)排气量不宜过大,以节约蒸汽3)灭菌将要结束时,应立即引入无菌空气以保持罐压,然后开夹套或蛇管冷却,以避免罐压迅速下降产生负压而吸入外界空气,或引起发酵罐破坏。4)在引入无菌空气前,罐内压力必须低于过滤器压力,否则培养基将倒流入过滤器。第32页,共45页,星期日,2025年,2月5日第1页,共45页,星期日,2025年,2月5日1、在发酵生产中,为什么要进行灭菌操作?2、为防止杂菌的污染,哪些物品需要灭菌?培养基、发酵设备、空气、管道、流加料等3、什么时候进行灭菌?生产菌接种前第2页,共45页,星期日,2025年,2月5日常用灭菌方法:干热灭菌、湿热灭菌、射线灭菌(射线、微波等)、化学灭菌(各种化学药品)、过滤除菌;1、干热灭菌法灼烧灭菌、在电热或红外线在设备内加热主要用于保持干燥的物料、器具等.常用烘箱,灭菌条件为在160℃下保温1h原理:根据氧化作用导致微生物死亡。第3页,共45页,星期日,2025年,2月5日2、湿热灭菌法原理:借助蒸汽释放的热使微生物细胞中的蛋白质、酶和核酸分子内部的化学键,特别是氢键受到破坏,引起不可逆的变性,使微生物死亡。灭菌条件:121℃,30min。适用范围:广泛应用于生产设备及培养基的灭菌例:高压灭菌锅第4页,共45页,星期日,2025年,2月5日湿热灭菌的原理第5页,共45页,星期日,2025年,2月5日湿热灭菌的优点:1)蒸汽来源容易,操作费用低廉,本身无毒2)蒸汽具有很强的穿透力,灭菌易于彻底3)蒸汽均有很大的潜热,冷凝后的水分有利于湿热灭菌4)蒸汽输送可借助本身的压强,调节方便,技术管理容易缺点:1)设备费用高2)不能用于怕受潮的物料灭菌第6页,共45页,星期日,2025年,2月5日3、射线灭菌紫外线、高速电子流的阴极射线、X射线和Y射线适用范围:无菌室、培养间问题:是否适于固体、液体物料灭菌?波长范围?第7页,共45页,星期日,2025年,2月5日4、化学药品灭菌法(1)第一大类:表面消毒剂高锰酸钾溶液:0.1~0.25%、漂白粉、75%的酒精、新洁尔灭和杜灭芬、甲醛37%、戊二醛、过氧乙酸、焦碳酸二乙酯、酚类。(作用原理?适用范围?)(2)第二大类:抗代谢药物化学结构与微生物必须的代谢物类似物例如:磺胺类化合物取代氨基苯甲酸(3)第三大类:抗生素不同种类其作用不同,要有针对性选择。适用范围:环境空气、皮肤及器械的表面消毒第8页,共45页,星期日,2025年,2月5日1、湿热灭菌中的相关定义致死温度:杀死微生物的极限温度。致死时间;在致死温度下,杀死全部微生物所需的时间。在致死温度以上,温度愈高,致死时间愈短。微生物的热阻:是指微生物在某一特定条件(主要是温度和加热方式)下的致死时间
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