第四章外植体的选择和消毒.pptVIP

植物组织培养湖北生态工程职业技术学院生物工程系*植物组织培养湖北生态工程职业技术学院生物工程系*第四章外植体的选择和消毒第1页，共28页，星期日，2025年，2月5日一、外植体的选择1.选择什么种类的植物2.选择植物体的部位、发育年龄和季节第2页，共28页，星期日，2025年，2月5日如：茎尖、茎段、块茎、鳞茎、球茎、表皮、皮层、维管束、髓细胞、树木的形成层，子叶、上胚轴、下胚轴、叶片、叶柄、叶枕和根，以及生殖器官中的花托、花瓣、花药、花粉、子房、胚珠、胚、胚乳、胚柄等都可以作为外植物体第3页，共28页，星期日，2025年，2月5日由于不同植物以及同一株植物在不同发育阶段和时期所取的同一组织和器官在组织培养过程中,其脱分化和再分化的难易程度不同.所以取外植物体时应考虑以下三个方面:1.取材的部位;2.取材的季节3.器官发育年龄的选择;4.取材大小的影响第4页，共28页，星期日，2025年，2月5日(1)茎尖是最普遍采用的部位，其分生能力强、生长速度快，且不带病毒，是获得脱毒苗的重要途径.规律：一般顶芽生长势比侧芽旺，比较容易成活.1.常见取材的部位第5页，共28页，星期日，2025年，2月5日(2)叶片规律：老叶和幼嫩的小叶比成熟叶片难于培养.幼嫩的小叶生理功能还不健全，分化能力差；老叶生理功能已经衰退，叶柄营养成分减少，难以分化.成熟叶片营养丰富，生理功能旺盛，光和作用能力强，细胞处于活性状态，容易脱分化和再分化1.常见取材的部位第6页，共28页，星期日，2025年，2月5日(3)茎如：大花萱草等植物的侧芽在土中，极易污染，而且分化能力很差，用花茎做外植体时效果很好，细胞脱分化和再分化都很快.1.常见取材的部位第7页，共28页，星期日，2025年，2月5日(4)鳞茎百合、大蒜等植物做外植物体时效果较其它部位好，且鳞茎的不同部位的再生能力有很大的差别，外层比内层鳞片叶的再生能力强，同一鳞片下段比中上段再生能力强.1.常见取材的部位第8页，共28页，星期日，2025年，2月5日因此，选择合适最能表达全能性的部位和组织，是决定组织培养成功的前提之一.1.常见取材的部位第9页，共28页，星期日，2025年，2月5日2.取材季节的选择规律：一般植物在旺盛生长期取材比较好，而在即将进入休眠期和休眠期的外植体的效果较差.如：苹果在3-6月份取材成活率为60%，7-11月份就下降到10%，12月至次年2月份则在10%以下.马铃薯在4月份和12月份取的茎做外植体有较高的块茎发生率，而在2-3月份或5-11月份取的则块茎发生率大大降低.百合的鳞片做外植物体时，在春、秋取材容易形成小鳞茎，而在夏、冬取材就难以形成小鳞茎第10页，共28页，星期日，2025年，2月5日在杂交育种过程中遇到杂种胚发育不良、早衰等现象，要在胚早衰之前取出并进行培养，一般都是在胚接近七八分成熟时而不是完全成熟时进行胚培养.杂种胚，特别是远缘杂交的胚，后期败育，一切生理活动都停止了，必须在败育之前进行培养.第11页，共28页，星期日，2025年，2月5日3.取材大小的影响要求：大小适宜，大的不易消毒，小的操作困难且不易成活.如：脱毒培养时要求茎尖大小为0.2-0.3mm；叶片做外植体时，不能小于5mm2第12页，共28页，星期日，2025年，2月5日3.取材大小的影响除叶片外，花瓣、茎段等也都不宜取得太小，但也不能过大。过大则难以消毒灭菌，容易引起污染等.第13页，共28页，星期日，2025年，2月5日二、外植体的消毒（一）外植体消毒灭菌的要求包括两个方面：把外植体上带的一切微生物，包括真菌、细菌及其他微生物都杀死不能损伤组织材料，保持外植体的生活力，使外植体在良好的培养条件下很快恢复生机，正常生长和繁殖.第14页，共28页，星期日，2025年，2月5日（二）常用消毒剂的种类和特性要求：具有良好的消毒作用，既不会杀死植物的组织细胞，又易被无菌水冲洗掉，不影响消毒后外植体的生长和分化.第15页，共28页，星期日，2025年，2月5日常用消毒剂效果比较消毒剂浓度(%)去除难易消毒时间（分）效果酒精70-75易0.2-2好次氯酸钠0.5-5易5-20很好氯化汞0.1-0.3较难2-10最好H2O210-12最易5-15好第16页，共28页，星期日，2025年，2月5日各种消毒剂的特性70%