PCR上岗证考试题库（含答案及解析）.docxVIP

PCR上岗证考试题库（含答案及解析）

填空题

DNA双螺旋结构中两条链的走向为反向平行，其中一股链为5’→3’走向，另一股链为3’→5’走向；DNA生物合成的方向始终是5’→3’。

核酸变性是指在极端pH值、高温（如94-98℃）等条件下，核酸分子中的氢键断裂，双螺旋结构解开成为单链的过程。

核酸分子杂交技术的核心原理是利用DNA的变性与复性特性，使互补的单链核酸形成双链复合物。

PCR扩增的三个基本阶段依次为变性、退火、延伸，其中引物与模板单链特异性结合的过程发生在退火阶段。

反转录PCR（RT-PCR）中，反转录酶催化cDNA合成的方向为5’→3’，该反应所需的引物为病毒颗粒中的mRNA（或Oligo(dT)、随机引物）。

PCR检测中“假阳性”结果的最主要来源是PCR产物的污染（如气溶胶污染、交叉污染）。

实验室常用加样器的量程需与吸取体积匹配：P10可吸取0.5-10μL，P20可吸取2-20μL，P100可吸取20-100μL，P200可吸取50-200μL；若需准确吸取100μL液体，应优先选用P100加样器。

基因扩增实验中使用带滤塞吸头的核心目的是防止标本间交叉污染（避免吸头内气溶胶扩散）。

TaqMan荧光定量PCR的关键原理是利用TaqDNA聚合酶的5’→3’外切酶活性，将探针降解后释放荧光信号；Ct值的定义是“每个反应管内荧光信号达到设定阈值时所经历的循环数”。

PCR技术于1983年由科学家Mullis发明；PCR产物短期（1-7天）可在4℃保存，长期需在**-20℃**保存以避免降解。

实时荧光定量PCR（qPCR）的定量方法分为绝对定量和相对定量，前者需依赖标准曲线，后者需通过内参基因校正。

PCR反应体系中，Mg2+的浓度一般控制在0.5-2mmol/L，其不仅影响TaqDNA聚合酶的活性，还会影响引物与模板的退火特异性。

单项选择题

以下关于PCR反应体系组成的描述，错误的是（）

A.模板DNA需保证完整性和纯度（避免抑制剂残留）

B.dNTP浓度过高可能导致非特异性扩增（增加错配概率）

C.TaqDNA聚合酶的最适反应温度为72℃

D.Mg2+浓度仅影响Taq酶活性，与引物退火无关

答案：D

解析：Mg2+可与dNTP、引物结合，影响引物与模板的互补配对效率，进而影响退火特异性，并非仅作用于Taq酶。

若目的基因的GC含量为60%，设计引物时其退火温度（Tm）推荐范围为（）

A.45-55℃B.55-65℃C.65-75℃D.75-85℃

答案：B

解析：GC含量越高，Tm值越高（GC间含3个氢键，AT间含2个）。常用Tm值计算公式为“Tm=4×(G+C)+2×(A+T)”，60%GC含量的引物Tm约为62℃，实际退火温度通常为Tm-5℃，故推荐55-65℃。

实时荧光定量PCR中，Ct值的准确定义是（）

A.荧光信号达到仪器本底噪声时的循环数

B.荧光信号首次超过设定阈值时的循环数

C.荧光信号达到平台期时的循环数

D.荧光信号强度最高时的循环数

答案：B

解析：Ct值与模板起始浓度呈负相关（模板浓度越高，Ct值越小），是qPCR定量的核心指标；平台期因酶活性下降、原料耗尽，信号不再线性增加，无法用于定量。

以下哪种物质会显著抑制TaqDNA聚合酶的活性？（）

A.EDTAB.NaClC.Tris-HClD.MgCl?

答案：A

解析：EDTA是金属螯合剂，可结合Taq酶活性必需的Mg2+，导致酶失活；NaCl（维持离子强度）、Tris-HCl（维持pH）是缓冲液常规成分，MgCl?是酶活性激活剂。

进行多重PCR（同一体系扩增多个目标片段）时，关键技术要点不包括（）

A.优化各引物浓度比例（避免引物间竞争）

B.确保各引物Tm值一致（避免非特异性结合）

C.增加dNTP浓度至常规2倍（常规浓度已满足需求）

D.调整Mg2+浓度（适配多对引物的退火需求）

答案：C

解析：dNTP浓度过高会增加错配概率，多重PCR无需刻意提高dNTP浓度，仅需保证总量满足所有片段合成需求即可。

逆转录PCR（RT-PCR）中，使用Oligo(dT)引物合成cDNA的适用模板是（）

A.所有RNA模板B.带poly(A)尾的mRNA

C.病毒单链RNAD.核糖体RNA（rRNA）

答案：B

解析：Oligo(dT)是由多个T组成的引物，可