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安徽科技学院学报，2022,36(1):50-58
JournalofAnhuScienceandTechnologyUniversity
基于异源包被诺氟沙星
间接竞争酶联免疫分析方法
陆宁12,张慧敏12,邢爽12,丁德杰〔，
陈鑫】，高瑾】，张潮】，蒲顺昌12
(1.亳州学院生物与食品工程系，安徽亳州236800；
2.药食同源功能食品亳州市重点实验室，安徽亳州236800)
摘：目的：建立诺氟沙星的间接竞争酶联免疫分析方法。方法：采用活泼酯法将诺氟沙星与牛血清蛋
白偶联制备免疫原，与鸡卵清蛋白偶联制备包被原；采用活泼酯法将氧氟沙星与鸡卵清蛋白偶联制备包被
原；用紫外吸收光谱法扫描鉴定以上人工抗原是否偶联成功。将免疫原通过动物免疫获得诺氟沙星抗体,
利用间接竞争酶联免疫分析方法确定最佳包被原、抗体和包被原的最佳工作浓度，优化二抗浓度、反应时
间，并对方法特异性和准确度进行评价。结果：选用氧氟沙星包被原时灵敏度较高，当氧氟沙星包被原浓
度为125ng/mL,抗体稀释倍数为500倍，二抗稀释倍数为5000倍，反应时间为30min时，对诺氟沙星的
识别灵敏度最高，半抑制浓度IC50为4.23ng/mL,定量检测线性范围(K*)〜ICs。)为0.29〜
61.83ng/mL,检测限IG0为0.06ng/mL。对诺氟沙星及其他4种常见氟喹诺酮类物质交叉反应率大于
5%,实际样品添加回收率范围在70%95%之间。结论：该检测方法具有较强的广谱性及较高的灵敏
度，可以快速检测鱼肉及蜂蜜中的诺氟沙星及其他4种常见氟喹诺酮类物质总量。
关键词：诺氟沙星;异源包被；间接竞争ELISA法
中图分类号:TS207.3文献标志码:A文章编号：1673-8772(2022)01-0050-09
开放科学(资源服务)标识码(OSID):；DOI：10.19608/j.cnki.2017.1042
DevelopmentofanIndirectCompetitive
EnzymeLinkedImmunoassayforNorfloxacin
LUNing12,ZHANGHuimin1，,XINGShuang，,DINGDejie1,
CHENXin1,GAOJin1,ZHANGChao1,PUShunchang12
(1BiologyandFoodEngineeringDepartment,BozhouUniversity,Bozhou236800,China；
2BozhouKeyLaboratoryofFunctionalFoodwithMedicineFoodHomology,Bozhou236800,China)
收稿日期2021-12-15
基金项目：安徽省高校自然科学研究项目(KJ2O2OAO767)；亳州市重点研发计划项目(bzzc2020018)；亳州学院自然科学研究项目
(BYZ2019C02,BY2019XZ02)；亳州学院学科团队建设项目(BYZXKTD1802)；安徽省大学生创新创业训练计划项目
(201912926035,201912926032)
作者简介:陆宁(1993—)男，安徽亳州人，博士，讲师，主要从事食品安全快速检测研究
通信作者:蒲顺昌，副教授,E-mail:bz-pushunchang@hotmail.como
第36卷第1期陆宁，等:基于异源包被诺氟沙星间接竞争酶联免疫分析方法51
Abstract:Objective：Todevelopanindirectcompetitiveenzyme-linkedimmunoassayforn
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