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2025年pcr上岗证题库及答案

一、单项选择题（每题2分，共30题）

1.以下哪种物质是PCR反应的必需成分？

A.限制性内切酶

B.dNTPs

C.逆转录酶

D.蛋白酶K

答案：B

2.实时荧光定量PCR（qPCR）中，Ct值的定义是？

A.荧光信号达到设定阈值时的循环数

B.扩增产物浓度达到平台期的循环数

C.引物二聚体开始形成的循环数

D.模板初始浓度的对数

答案：A

3.PCR实验室分区中，禁止带入扩增产物的区域是？

A.试剂准备区

B.样本处理区

C.扩增区

D.产物分析区

答案：A

4.引物设计时，GC含量通常建议控制在？

A.10%-20%

B.20%-30%

C.40%-60%

D.70%-80%

答案：C

5.为避免气溶胶污染，PCR实验室应配备的关键设备是？

A.超净工作台

B.生物安全柜

C.带滤芯的移液器

D.高速离心机

答案：C

6.以下哪种情况会导致qPCR扩增曲线出现“平台期提前”？

A.模板浓度过低

B.引物浓度过高

C.退火温度过高

D.dNTPs浓度不足

答案：B

7.进行新冠病毒核酸检测时，内参基因的主要作用是？

A.验证扩增效率

B.排除样本抑制物干扰

C.提高检测灵敏度

D.区分不同病毒亚型

答案：B

8.PCR反应体系配制时，正确的操作顺序是？

A.先加酶，再加缓冲液，最后加模板

B.先加模板，再加引物，最后加酶

C.先加缓冲液、dNTPs、引物，最后加酶和模板

D.所有成分同时加入后混匀

答案：C

9.实验室高压蒸汽灭菌的标准条件是？

A.100℃，30分钟

B.121℃，15-20分钟

C.135℃，5分钟

D.65℃，60分钟

答案：B

10.以下哪种物质可用于PCR实验室台面的常规消毒？

A.75%乙醇

B.生理盐水

C.去离子水

D.10%甲醛

答案：A

11.反转录PCR（RT-PCR）中，逆转录的关键温度通常是？

A.25℃

B.37℃

C.50℃

D.95℃

答案：C

12.扩增产物电泳时出现“smearedband（拖尾条带）”，最可能的原因是？

A.引物特异性差

B.模板浓度过高

C.退火温度过低

D.以上均可能

答案：D

13.qPCR中SYBRGreenⅠ染料的作用是？

A.特异性结合目标序列

B.非特异性插入双链DNA

C.标记引物

D.淬灭荧光信号

答案：B

14.PCR实验室人员进入样本处理区前必须穿戴的防护装备不包括？

A.一次性帽子

B.N95口罩

C.长袖实验服

D.露指手套

答案：D

15.某样本qPCR检测结果显示：目标基因Ct=32，内参基因Ct=28，对照样本内参Ct=25，最可能的解释是？

A.样本中目标基因高表达

B.样本存在扩增抑制

C.内参基因扩增失败

D.引物二聚体干扰

答案：B

16.以下哪种措施不能有效预防PCR污染？

A.不同区域使用专用移液器

B.实验后用紫外线照射30分钟

C.重复使用一次性吸头

D.设置阴性对照

答案：C

17.进行多重PCR时，引物设计的关键要求是？

A.所有引物Tm值一致

B.引物长度差异≥10bp

C.避免引物间互补配对

D.仅需关注目标基因特异性

答案：C

18.荧光探针法qPCR中，TaqMan探针的5端标记的是？

A.荧光报告基团（FAM）

B.淬灭基团（TAMRA）

C.生物素

D.地高辛

答案：A

19.实验室废弃的扩增产物应如何处理？

A.直接倒入下水道

B.高压灭菌后按医疗废物处理

C.用乙醇浸泡后丢弃

D.常温放置7天后丢弃

答案：B

20.以下哪项是PCR反应延伸阶段的最佳温度？

A.55℃

B.72℃

C.95℃

D.4℃

答案：B

21.某批次检测中，所有阴性对照均出现扩增（Ct=35），最可能的原因是？

A.样本交叉污染

B.试剂被扩增产物污染

C.仪器温度不准确

D.内参基因扩增

答案：B

22.提取病毒RNA时，若使用TRIzol试剂，关键步骤是？

A.