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2025年PCR检测上岗证考试题库(含答案)

一、单项选择题（每题2分，共30题）

1.聚合酶链式反应（PCR）技术的发明人是：

A.KaryMullis

B.JamesWatson

C.FrancisCrick

D.FrederickSanger

答案：A

2.PCR反应中，引物的长度通常建议为：

A.5-10bp

B.15-30bp

C.35-50bp

D.50-100bp

答案：B

3.TaqDNA聚合酶的最适反应温度是：

A.55℃

B.72℃

C.95℃

D.60℃

答案：B

4.实时荧光定量PCR（qPCR）中，扩增曲线的“指数增长期”对应的是：

A.荧光信号低于基线的阶段

B.荧光信号与模板浓度呈对数关系的阶段

C.荧光信号达到平台期的阶段

D.荧光信号开始衰减的阶段

答案：B

5.内参基因（管家基因）在qPCR中的主要作用是：

A.提高扩增效率

B.校正样本加样量差异

C.增加荧光信号强度

D.减少非特异性扩增

答案：B

6.SYBRGreenI荧光染料法的主要缺点是：

A.成本过高

B.无法区分特异性与非特异性扩增

C.只能用于定性检测

D.对酶活性抑制明显

答案：B

7.反转录PCR（RT-PCR）中，以mRNA为模板合成cDNA需要的酶是：

A.TaqDNA聚合酶

B.逆转录酶

C.DNA连接酶

D.限制性内切酶

答案：B

8.PCR实验室“分区管理”中，产物分析区属于：

A.清洁区

B.半污染区

C.污染区

D.缓冲区

答案：C

9.为防止扩增产物污染，实验室常用的UNG酶（尿嘧啶-N-糖苷酶）处理应在哪个阶段进行？

A.样本处理前

B.PCR扩增时

C.产物分析后

D.引物设计阶段

答案：A

10.绝对定量PCR的标准曲线制作需要使用：

A.已知浓度的标准品

B.待测样本的稀释液

C.内参基因扩增产物

D.随机引物

答案：A

11.PCR产物电泳时，若出现“smearedband（拖尾条带）”，最可能的原因是：

A.引物浓度过低

B.模板浓度过高

C.Mg2+浓度过低

D.退火温度过高

答案：B

12.核酸提取过程中，加入蛋白酶K的主要目的是：

A.裂解细胞膜

B.降解RNA

C.消化蛋白质杂质

D.沉淀核酸

答案：C

13.qPCR结果判读中，“NTC（无模板对照）”出现扩增曲线，说明：

A.实验结果可靠

B.存在污染

C.引物特异性差

D.扩增效率过高

答案：B

14.进行RNA-PCR时，实验台面需用以下哪种试剂处理以降解RNA酶？

A.75%乙醇

B.DEPC水

C.次氯酸钠

D.胰蛋白酶

答案：B

15.定量PCR中，扩增效率（E）的理想范围是：

A.80%-90%

B.90%-110%

C.70%-80%

D.110%-120%

答案：B

16.多重PCR的关键技术是：

A.提高退火温度

B.优化引物对之间的兼容性

C.增加模板量

D.使用高保真酶

答案：B

17.以下哪种物质不会抑制PCR反应？

A.血红蛋白

B.EDTA

C.牛血清白蛋白（BSA）

D.胆盐

答案：C

18.荧光探针法（如TaqMan探针）的特异性主要取决于：

A.探针与目标序列的互补性

B.SYBRGreen的结合能力

C.引物的长度

D.扩增循环数

答案：A

19.PCR反应体系中，dNTP的作用是：

A.提供反应缓冲环境

B.作为合成DNA的原料

C.激活Taq酶活性

D.稳定模板结构

答案：B

20.实验室高压蒸汽灭菌的标准条件是：

A.100℃，30分钟

B.121℃，15-20分钟

C.160℃，2小时

D.80℃，60分钟

答案：B

21.以下哪项不是PCR质量控制的关键环节？

A.样本采集与保存

B.核酸提取纯度

C.扩增仪温度准确性

D.实验人员着装颜色

答案：D

22.检测新型冠状病毒（RNA病毒）时，正确的检测流程是：

A.样本处理→RT-PCR→核酸提取→结果分析

B.样本处理→核酸提取→RT-PCR→结果分析

C.核酸提取→样本处理→RT