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2025年PCR检验技术培训测验试题及答案

一、单项选择题（每题2分，共30题，合计60分）

1.以下关于PCR技术基本原理的描述，错误的是（）

A.通过高温变性、低温退火、适温延伸三个步骤循环扩增DNA

B.扩增产物的特异性由引物与模板的互补配对决定

C.TaqDNA聚合酶具有3’→5’外切酶活性，可校正扩增错误

D.理论上，每轮循环后目标DNA片段数量呈指数增长

2.实时荧光定量PCR（qPCR）中，SYBRGreenI染料的作用机制是（）

A.与双链DNA小沟结合，发出荧光

B.与引物5’端标记的荧光基团特异性结合

C.通过水解探针释放荧光报告基团

D.仅与单链DNA结合并激发荧光

3.进行逆转录PCR（RT-PCR）时，若模板为总RNA，需首先去除样品中的基因组DNA污染，常用方法是（）

A.加入RNase抑制剂

B.使用DNA酶I消化处理

C.提高逆转录反应温度

D.增加引物浓度

4.PCR反应体系中，dNTP的最佳浓度范围通常为（）

A.0.01-0.1mmol/L

B.0.1-0.5mmol/L

C.1-5mmol/L

D.5-10mmol/L

5.引物设计时，若目标片段GC含量较高（65%），为提高扩增特异性，可采取的措施是（）

A.降低退火温度

B.增加引物长度至30-35bp

C.减少引物GC含量至低于40%

D.加入二甲基亚砜（DMSO）

6.以下哪种物质不会导致PCR抑制（）

A.肝素

B.血红蛋白

C.牛血清白蛋白（BSA）

D.EDTA

7.定量PCR中，绝对定量与相对定量的主要区别是（）

A.绝对定量需标准曲线，相对定量需内参基因

B.绝对定量使用SYBRGreen，相对定量使用探针

C.绝对定量检测DNA，相对定量检测RNA

D.绝对定量用于病原体检测，相对定量用于基因表达分析

8.PCR实验室分区中，产物分析区（第四区）的主要功能是（）

A.试剂准备与分装

B.模板提取与纯化

C.PCR扩增反应

D.扩增产物的检测与分析

9.某实验中，阴性对照出现扩增曲线（Ct=30），最可能的原因是（）

A.引物二聚体形成

B.模板加样量过大

C.移液器交叉污染

D.扩增仪温度失控

10.TaqDNA聚合酶的最适延伸温度是（）

A.55℃

B.72℃

C.95℃

D.60℃

11.以下关于内参基因的描述，错误的是（）

A.需在所有检测样本中稳定表达

B.常用基因包括GAPDH、β-actin

C.用于校正样本加样量差异

D.内参基因的Ct值应显著高于目标基因

12.进行多重PCR时，需特别注意（）

A.所有引物的退火温度一致

B.目标片段长度差异至少50bp

C.dNTP浓度降低至0.05mmol/L

D.仅使用SYBRGreen染料

13.若PCR扩增产物出现smeared（拖尾）条带，可能的原因是（）

A.引物浓度过低

B.模板DNA降解

C.退火温度过高

D.Taq酶量不足

14.荧光探针法qPCR中，TaqMan探针的设计原则不包括（）

A.探针长度18-25bp

B.探针GC含量高于引物

C.避免连续4个G碱基

D.探针5’端标记报告基团，3’端标记淬灭基团

15.实验室进行PCR检测时，若怀疑存在气溶胶污染，最有效的处理方法是（）

A.用75%乙醇擦拭台面

B.紫外线照射30分钟以上

C.更换实验服

D.增加阴性对照数量

16.以下哪种PCR技术可用于单核苷酸多态性（SNP）检测（）

A.巢式PCR

B.等位基因特异性PCR（AS-PCR）

C.多重PCR

D.逆转录PCR

17.定量PCR中，Ct值与初始模板量的关系是（）

A.Ct值越大，初始模板量越多

B.Ct值越小，初始模板量越多

C.Ct值与初始模板量无关

D.Ct值的平方与初始模板量成正比

18.提取病毒RNA进行RT-PCR时，若未添加RNase抑制剂，可能导致（）

A.基因组DNA污染

B.RNA降解，扩增效率降低

C.引物二聚体增多

D.产物条带变亮

19.PCR反应体系中，Mg2+浓度过高会导致（）

A.酶活性抑制