肿瘤细胞培养中常用技术.pptVIP

第29页，共47页，星期日，2025年，2月5日第30页，共47页，星期日，2025年，2月5日（2）培养小室模型原理：体外培养肿瘤细胞在趋化作用下可穿过多孔生物膜，穿膜细胞经染色后显微镜下计数或MTT比色测定OD值。优点：操作简单，实验周期短、易定量分析。应用：研究细胞分化和细胞与基质的相互作用、观察药物对细胞侵袭的影响。第31页，共47页，星期日，2025年，2月5日第32页，共47页，星期日，2025年，2月5日（3）琼脂糖滴模型原理方法：将癌细胞、培养液和琼脂糖混合成琼脂糖细胞悬液，然后在培养板或培养皿底制成琼脂糖小滴，经低温凝固，加入培养液培养，不同时间测量肿瘤细胞从琼脂糖滴边缘移出的距离，评价肿瘤细胞移动能力。第33页，共47页，星期日，2025年，2月5日第1页，共47页，星期日，2025年，2月5日内容提要：1.肿瘤发生中的细胞生物学机制2.体外培养肿瘤细胞特点3.肿瘤细胞培养中常用技术①抗癌药物敏感性试验②肿瘤细胞转移体外模型的建立第2页，共47页，星期日，2025年，2月5日细胞凋亡细胞增殖失控与端粒酶细胞分化侵袭与转移抑癌基因失活原癌基因激活一、肿瘤发生中的细胞生物学机制第3页，共47页，星期日，2025年，2月5日二、肿瘤体外培养细胞优点：1.免受机体内部因素影响2.可长期保存3.快速筛选抗癌药4.费用低缺点：与体内环境有差异，应结合体内试验第4页，共47页，星期日，2025年，2月5日肿瘤细胞取材及培养一般取自患者。实体瘤：原发癌组织或转移灶胸、腹腔炎：胸水或腹水白血病：血液或骨髓液注：取材后及时培养勿放置过久第5页，共47页，星期日，2025年，2月5日常用的肿瘤细胞系1.2./181817_Category_2073020_1.html（美国ATCC细胞库中国代理）3./xibao/catalogue.html4./phtml第6页，共47页，星期日，2025年，2月5日三、肿瘤细胞培养中常用技术1.抗癌药物敏感性试验2.肿瘤细胞转移体外模型的建立第7页，共47页，星期日，2025年，2月5日1.抗癌药物敏感性试验美蓝法染料排斥法生长曲线测定法集落形成试验法MTT比色法裸鼠成瘤实验法第8页，共47页，星期日，2025年，2月5日美蓝法原理：利用活细胞的脱氢酶提供氢离子，使甲烯蓝（美蓝）还原为甲烯白（无色），细胞死亡之后，脱氢酶失活，无法使甲烯蓝还原，因此被染成蓝色，检测用药后的死细胞数能反映药物的抑瘤作用。缺点：假阳性率高第9页，共47页，星期日，2025年，2月5日台盼蓝排斥试验原理：台盼蓝能使死细胞着色（淡蓝色），而活细胞拒染。活细胞总数×100活细胞率（％）＝活细胞总数＋死细胞总数注意：简单，最常用。染色时间不宜过长第10页，共47页，星期日，2025年，2月5日生长曲线测定法原理：癌细胞在最适条件下呈指数生长，当细胞处于对数生长期时用于试验，以细胞数的对数与培养时间可得一条生长曲线，比较加药组合对照组细胞生长曲线，可反映出药物对肿瘤细胞生长的影响。第11页，共47页，星期日，2025年，2月5日dCellnumber(×104)lg计算药物对细胞的杀伤率、药物对细胞倍增时间影响、药物对细胞生长饱和密度影响第12页，共47页，星期日，2025年，2月5日集落形成试验法原理：肿瘤细胞系由不同比例增殖及分化能力不同的细胞组成，其中含有极少部分具有自我复制和增值能力的干细胞，具有分化和形成集落的特性，约占1%，其与肿瘤治愈、复发或转移密切相关。因其具有分化及形成集落的能力，故用集落法可体外检测抗癌药物敏感性。第13页，共47页，星期日，2025年，2月5日四唑盐（MTT）比色法商品名为噻唑蓝原理：活细胞中脱氢酶能将四唑盐还原成不溶干水的蓝紫色产物（formazan)，并沉淀在细胞中，而死细胞没有这种功能。二甲亚砜（DMSO）能溶解沉积在细胞中蓝紫色结晶物，溶液颜色深浅与所含的formazan量成正比。再用酶标仪测定OD值MTT法简单快速、准确，广泛应用于新药筛选、细胞毒牲试验、肿瘤放射敏感性实验等。第14页，共47页，星期日，2025年，2月5日XTT比色法：与MTT类似，但产生的橙黄色甲儹（formazan）溶于水。缺点：水溶液不稳定，需低温保存或现用现配。CCK-8比色法：1