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基于CRISPRCas9技术的ETS1基因敲除猪模型构建

目录

基于CRISPRCas9技术的ETS1基因敲除猪模型构建（1）．．．．．．．．．．．．4

项目概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4

1.1研究背景．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．5

1.1.1ETS1基因功能简介．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．6

1.1.2CRISPRCas9技术原理．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．8

1.2研究意义与目标．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．10

1.2.1实验意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．11

1.2.2具体目标．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．13

实验材料与制备．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．14

2.1动物材料．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．20

2.1.1猪种选择．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．21

2.1.2基因型鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．26

2.2载体与试剂．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．27

2.2.1CRISPRCas9质粒构建．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．29

2.2.2关键试剂配置．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．31

实验方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．32

3.1基因敲除方案设计．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．35

3.1.1sgRNA靶向位点筛选．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．38

3.1.2体外验证．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．40

3.2体内基因编辑．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．43

3.2.1受精卵显微注射．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．46

3.2.2胚胎移植．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．49

3.3理化检测方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．53

3.3.1基因型鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．55

3.3.2转录水平分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．57

结果与分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．58

4.1基因敲除效率评估．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．60

4.1.1胚胎发育检测．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．60

4.1.2新生儿基因型验证．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．62

4.2表型分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．65

4.2.1表观遗传学变化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．69

4.2.2生物学功能验证．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．71

基于CRISPRCas9技术的ETS1基因敲除猪模型构建（2）．．．．．．．．．．．77

一、文档概括．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．77

1.1研究背景与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．80

1.2研究目的与内容．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．80

1.3研