脉冲标记DNA复制和细胞周期测定的研究修改版.pptxVIP

关于细胞周期长短测定的研究作者：RichardFantas

脉冲标记法是一种建立较早且被广泛采用的方法，这种方法主要适用于细胞种类构成简单、细胞周期相对较短，周期均匀的细胞群体。用3H-TdR短期饲养细胞，然后置换新培养液继续培养，之后每隔一段时间进行放射自显影观察分析，确定处于某一时期的细胞数量，进而确定细胞周期各个时相的长短

01S期的细胞被3H-TdR标记，假设之后各个细胞周期相同，且不同细胞细胞周期运转速率相同则如图所示，可认为淡蓝色图形为所有的细胞（横向代表时间，纵向代表细胞个数）0203

S期G2期M期时间细胞个数标记细胞经过时间的推移，我们来看看标记细胞最前面的进入了哪个时期先头细胞

G2期M期时间细胞个数标记细胞G2期所占时间TG2细胞开始进入M期先头细胞进入M期带标记的分

裂细胞个数时间

G2期01M期02时间03细胞个数04重叠面积达到最大05未进入M期的标记细胞06先头细胞进入M期末期07M期所占时间TM08带标记的分

裂细胞个数09时间10TM11

G2期01M期02时间03细胞个数04带标记的分

裂细胞个数05时间06先头细胞达到最大值的50%07后尾细胞达到最大值的50%08S期09S期所占时间Ts10TS11

先头细胞正好经历过整个周期G2期M期时间细胞个数带标记的分

裂细胞个数时间G1期S期下一细胞周期先头细胞达到最大值的50%G2期先头细胞达到最大值的50%整个细胞周期TCM期间期TC

到这里，突然出现一个问题，由求Ts的图可以看出直线1和直线2的长度相等，可以平移01带标记的分

裂细胞个数03L102时间04L2

L1又可以平移到右侧L31带标记的分

裂细胞个数2时间3L14L35

那么计算S期的公式将有如下的三个：1.Ts=M期细胞总数到最大值的一半，经历到最大值，再下降到一半所用的时间2.Ts=先头细胞先到达M期，再上升到最大值，最后即将下降所用的时间3.Ts=先头细胞刚上升到最大值，再下降到最小值所用的时间而且看起来公式2和3要比公式1简单许多，因为最大值的一半不好找，而上升和下降的拐点则容易找孰对孰错？？？

S期G2期M期时间细胞个数其实这是因为我们假定处在S期中各个时期的细胞个数相等。

如果不相等，则如下图所示标记细胞

G2期M期时间带标记的分

裂细胞个数时间先头细胞达到最大值的50%后尾细胞达到最大值的50%S期S期所占时间TsTS这里的图像便不是原来对称的等腰梯形了！！

G2期1M期2时间3先头细胞达到最大值的50%4后尾细胞达到最大值的50%5S期6不轴对称图形的等面积分线不在底边中间，因而分底边所得的两条线段不相等！7

带标记的分

裂细胞个数时间L1L2结合上一张图，可以得出这里L1不等于L2

因而对于如下的三个计算S期的公式：1.Ts=M期细胞总数到最大值的一半，经历到最大值，再下降到一半所用的时间（时刻准确）2.Ts=先头细胞先到达M期，再上升到最大值，最后即将下降所用的时间（在特殊情况下准确）3.Ts=先头细胞刚上升到最大值，再下降到最小值所用的时间（在特殊情况下准确）因此虽然公式1比较麻烦，但是得出的结论符合一般情况，而公式2和3只有在特殊情况下（即假设细胞分布的图像是轴对称图形）才能够成立。 而且观察图线虽然容易得到拐点，但是拐点处斜率变化很大，取值精确度低，而在50%左右的地方，斜率变化趋于平缓，此时取值更为准确。 考虑到实验的准确性和正确性，应当取公式1

同时我们也应当牢记其余的几个公式，下面再复习一遍

【TG1=Tc-(TM+Ts+TG2)】间期TM时间TCTS123456

敢竭鄙怀，恭疏见解，

请洒潘江，各倾陆海云尔。

谢谢观赏！